elisa試驗是一種敏感性高,特異性強,elisa試劑盒重復性好的實驗診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存,操作簡便,結果判斷較客觀等因素,已廣泛應用在免疫學檢驗的各領域中。elisa檢測試劑盒是用于體外定性檢測人血清或血漿中的抗人類戊型肝炎(hev)病毒 igm 抗體elisa檢測。
以下為具體操作步驟:
用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法
1.包被:用0.05mph9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1~10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml,4℃ 過夜。次日,棄去孔內溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡稱洗滌,下同)。
2.加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃ 孵育1小時。然后洗滌。(同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔)。
3.加酶標抗體:于各反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標抗體(經滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小時,洗滌。
4.加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的tmb底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。
5.終止反應
6.結果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結果:反應孔內顏色越深,陽性程度越強,陰性反應為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+、“-號表示。也可測od值:在elisa檢測儀上,于450nm(若以abts顯色,則410nm)處,以空白對照孔調零后測各孔od值,若大于規(guī)定的陰性對照od值的2.1倍,即為陽性。