細(xì)胞被支原體污染了,怎么辦?

發(fā)布時(shí)間:2024-04-06
對(duì)于已耗費(fèi)很多時(shí)間、大量擴(kuò)增起來的細(xì)胞,或經(jīng)過基因轉(zhuǎn)染、體外刺激等大量工作處理過的細(xì)胞,如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞被支原體污染了,怎么辦?古朵生物為您分析如何有效把支原體污染趕出你的細(xì)胞!
由于前期工作量巨大,我們無法丟棄已有細(xì)胞。但由于價(jià)格原因,又無法使用那些昂貴試劑殺除細(xì)胞上的支原體,同時(shí),實(shí)驗(yàn)人員還需要清除細(xì)胞上的支原體污染,讓實(shí)驗(yàn)得以往下推進(jìn),以蕞終獲得準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
實(shí)驗(yàn)者可選用對(duì)支原體特-效的抑制劑,通過對(duì)細(xì)胞的前期處理,中期加藥,逐步通過4代左右的培養(yǎng),從而將支原體污染*清除,確保試驗(yàn)順利推進(jìn),結(jié)果準(zhǔn)確。
支原體污染對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)造成多方面的不良影響,已經(jīng)成為在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)的一個(gè)嚴(yán)重問題,保守估計(jì)常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)中支原體污染率為15-35%,嚴(yán)重干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。因此,定期進(jìn)行支原體檢測和去除,確保無支原體存在細(xì)胞培養(yǎng)體系內(nèi)才能獲得準(zhǔn)確有效的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
什么是支原體(mycoplasma)
支原體又稱霉形體,直徑在0.1-0.3μm,是目前發(fā)現(xiàn)的蕞小的蕞簡單的原核生物,可以輕松地通過濾膜,混入培養(yǎng)系統(tǒng)中,呈高度多形性,有球形、桿形、絲狀、分支狀等多種形態(tài)。通常依附在細(xì)胞膜表面,支原體沒有剛性的細(xì)胞壁,因此普通的抗生素對(duì)它根本不起作用,實(shí)驗(yàn)室常見的種類有:口腔支原體、精氨酸支原體、豬鼻支原體、發(fā)酵支原體、人型支原體、唾液支原體、肺支原體和梨支原體等。
支原體污染的后果
細(xì)菌和真菌造成的污染相對(duì)比較容易檢測、預(yù)防和去除,然而支原體造成的污染很難察覺,即使生長密度高達(dá) 107-109cfu/ml,也很難有污染跡象(渾濁、ph 變化等)。支原體污染后導(dǎo)致細(xì)胞生長變慢,狀態(tài)變差,不會(huì)馬上使細(xì)胞致死,但會(huì)影響細(xì)胞內(nèi)的各種參數(shù),如改變細(xì)胞膜抗原性,改變細(xì)胞新陳代謝,干擾核酸的合成,改變 dna 轉(zhuǎn)染效率,導(dǎo)致染色體畸變等。
典型的支原體污染來源
①細(xì)胞之間交叉污染; ④培養(yǎng)基或其他試劑污染;
②工作環(huán)境或?qū)嶒?yàn)器材的污染; ⑤制備細(xì)胞的原始組織或器官的污染;
③實(shí)驗(yàn)者無菌操作不佳;
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