鈣黃綠素 am 是一種膜滲透性熒光酯酶底物，通常用于檢測細(xì)胞活性和質(zhì)膜完整性。作為一種近中性的底物，鈣黃綠素 am 可以自由、無創(chuàng)地?cái)U(kuò)散穿過質(zhì)膜并滲透到活細(xì)胞的胞質(zhì)溶膠中。一旦進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，代謝活躍細(xì)胞中的胞質(zhì)酯酶會迅速將非熒光鈣黃綠素am底物水解成鈣黃綠素產(chǎn)物，并由具有完整質(zhì)膜的細(xì)胞保留。由于死細(xì)胞缺乏酯酶活性，因此僅標(biāo)記活細(xì)胞。在藍(lán)光激發(fā)下，鈣黃綠素發(fā)出強(qiáng)烈的綠色熒光，與細(xì)胞酯酶的活性和樣品中存在的活細(xì)胞數(shù)量成正比。與其他活細(xì)胞標(biāo)記試劑（如bcecf am或羧基熒光素二乙酸酯）相比，鈣黃綠素am熒光更亮、光穩(wěn)定性更好，低細(xì)胞毒性有利于細(xì)胞追蹤、細(xì)胞凋亡和細(xì)胞毒性的研究。
aat bioquest 提供多種可供選擇的用于細(xì)胞活力分析的鈣黃綠素am產(chǎn)品。除了傳統(tǒng)的綠色熒光鈣黃綠素am之外，我們還提供發(fā)出藍(lán)色、橙色、紅色和深紅色熒光的鈣黃綠素am衍生物。
鈣黃綠素活性染料選擇指南dye
calcein blue
cytocalcein™ violet 450
calcein ultrablue™
cytocalcein™ violet 500
calcein ultragreen™
calcein
calcein orange™
calcein red™
calcein deep red™
principle
in live cells, non-fluorescent calcein am is converted to a fluorescent calcein product after am ester hydrolysis by intracellular esterases.
readout
live cells are highly fluorescent and easily distinguishable from dead cells, which are non-fluorescent.
laser(nm)
uv (350)
violet (405)
uv (350)
violet (405)
blue (488)
blue (488)
green (532)
yellow (561-568)
red (633-647)
ex/em(nm)
354/441
406/445
359/458
420/505
492/514
501/521
531/545
562/576
643/663
multiplexable
yes
yes
yes
yes
yes
yes
yes
yes
yes
dye compatibility
compatible with green and red fluorescent proteins, indicators, and other probes
compatible with green and red fluorescent proteins, indicators, and other probes
compatible with green and red fluorescent proteins, indicators, and other probes
compatible with blue and red fluorescent proteins, indicators, and other probes
compatible with blue and red fluorescent proteins, indicators, and other probes
compatible with blue and red fluorescent proteins, indicators, and other probes
compatible with blue and red fluorescent proteins, indicators, and other probes
compatible with blue and green fluorescent proteins, indicators, and other probes
compatible with blue and green fluorescent proteins, indicators, and other probes
sample type
live cells
platform
fluorescence microscope, fluorescence microplate reader, flow cytometer
cat no.
am ester
22007
22012
21908
22013
21905
22003
22009
21900
22011
reference dye
22006
21909
22001
22008
21901
21902
spectrum
calcein blue am, calcein orange™ diacetate, calcein red™ am, and calcein deep red™ am用于多功能分析
calcein am ( 22004 )是細(xì)胞活星的主要指標(biāo)，它具有被動的細(xì)胞內(nèi)擴(kuò)散、低細(xì)胞毒性、出色的細(xì)胞保留以及在生理ph范圍內(nèi)的強(qiáng)熒光強(qiáng)度。因此，鈣黃綠素在~ 521 nm處的熒光發(fā)射值使得與gfp轉(zhuǎn)染細(xì)胞或其他綠色熒光指示劑結(jié)合使用以進(jìn)行多重分析具有挑戰(zhàn)性。為了解決鈣黃綠素am的單一顏色限制，aat bioquest開發(fā)了具有多種顏色選擇的鈣黃綠素衍生物，包括鈣黃綠素藍(lán)am、鈣黃綠素橙™am、鈣黃綠素紅™am和鈣黃綠素深紅™am染料，用于多色標(biāo)記和活細(xì)胞的功能分析（表1）。
calcein blue amcalcein blue am (22007) 是一種 uv-light可激發(fā)活性指示劑，可在ph 4-11下發(fā)出明亮的藍(lán)色熒光(em = ~441)，專為與檢測藍(lán)色熒光的儀器一起使用。它可以與磷脂酰*氨酸染色劑annexin v ifluor® 488 (20071)和核酸死細(xì)胞染色劑7-aad (17501)結(jié)合使用，用于活/凋亡/壞死細(xì)胞群的三色區(qū)分（圖1），如以及用于多色功能分析的gfp、rfp和其他綠色或紅色熒光探針。
calcein orange™ diacetatecalcein orange™ diacetate (22007) 是藍(lán)/綠光可激發(fā)活力指示劑，可發(fā)出明亮的橙色熒光(em = ~545 nm)。與calcein am一樣.calcein orange™ diacetate是一種非熒光透膜底物，需要酯酶水解才能激活其熒光，calcein orange™ 在質(zhì)膜未受損的活細(xì)胞中具有出色的細(xì)胞滯留性，使其成為一種有價值的細(xì)胞示蹤劑和活細(xì)胞標(biāo)記試劑。它可以與藍(lán)色或綠色熒光探針結(jié)合使用，例如hoechst 33342 (17535, 圖 2) 或者鈣指示劑 cal-520®am (21130),
calcein red™ am and calcein deep red™ amcalcein red™ am (21900) 和 calcein deep red™ am (22011).在被胞質(zhì)酯酶水解后, calcein red™ (ex/em = 562/576 nm) 和calcein deep red™ (ex/em = 643/663 nm)被細(xì)胞膜完整保留并在對應(yīng)的光源激發(fā)下發(fā)出黃色或紅色熒光，calcein red™ am 和 calcein deep red™ am均可與藍(lán)色和綠色熒光探針結(jié)合使用
cytocalcein™ violet 450
=
calcein orange™ diacetate
calcein deep red™ am
用calcein™ blue am (blue,22007), annexin v ifluor® 488 (green,20071), 和7-aad (red,17501).;對 staurosporine 處理的 jurkat 細(xì)胞進(jìn)行染色；使用calcein orange™ diacetate (22007) 和核酸染料hoechst 33342 (17535).;流式細(xì)胞術(shù)分析用2 µm calcein deep red™ am (22011, 紅色）染色的活 jurkat 細(xì)胞和在 55°c 水浴中處理 30 分鐘的死細(xì)胞群（綠色）使用 novocyte 3000 流式細(xì)胞儀。
表1.鈣黃綠素，am特性產(chǎn)品名稱
分子量
ex/em (nm)
規(guī)格
貨號
calcein blue, am *cas 168482-84-6*
465.41
354/441 nm
1 mg
22007
calcein, am *cas 148504-34-1*
994.86
501/521 nm
1 mg
22002
calcein, am *ultrapure grade* *cas 148504-34-1*
994.86
501/521 nm
1 mg
22003
calcein, am *ultrapure grade* *cas 148504-34-1*
994.86
501/521 nm
20x50 µg
22004
calcein orange™ diacetate
877.24
531/545 nm
1 mg
22009
calcein red™ am
1015.79
562/576 nm
1 mg
21900
calcein deep red™ am ester
373.66
643/663 nm
1 mg
22011
cytocalcein™ violet viability針對流式細(xì)胞術(shù)和成像進(jìn)行了優(yōu)化
cytocalcein™ violet 450 和 cytocalcein™ violet 500針對流式細(xì)胞儀的使用進(jìn)行了優(yōu)化，將非熒光 cytocalcein™ violet 450 am 和 cytocalcein™ violet 500 am 酶促轉(zhuǎn)化為高熒光 cytocalcein™ violet 450 和 cytocalcein™ violet 500 產(chǎn)品（ex/em maxima ~406/445 nm，在大多數(shù)流式細(xì)胞儀中都有發(fā)現(xiàn)。結(jié)合帶有紅色熒光核酸死細(xì)胞染料的碘化丙錠（pi，ex/em maxima ~537/618 nm）或 7-aminoactinomycin d（7-aad，ex/em ~549/648 nm），cytocalcein™ violet 染料是出色的熒光團(tuán)，用于膜完整性和酯酶活性對活細(xì)胞和死細(xì)胞進(jìn)行雙色區(qū)分。去除代表死細(xì)胞的數(shù)據(jù)點(diǎn)是提高流式細(xì)胞術(shù)分析準(zhǔn)確性的關(guān)鍵步驟。
cytocalcein™ violet 450 和 cytocalcein™ violet 500 可作為 1 mg 單位規(guī)格的獨(dú)立試劑使用。此外，cytocalcein™ violet 450 在 cell meter™ 細(xì)胞活力檢測試劑盒中用作活力指示劑 *405 nm 激發(fā)的藍(lán)色熒光*(22784)。該試劑盒提供優(yōu)化的細(xì)胞標(biāo)記方案和充足的試劑，包括 cytocalcein™ violet 450、dmso 和緩沖液，可使用 200 µl 分析體積和標(biāo)準(zhǔn)熒光酶標(biāo)儀進(jìn)行 500 次測試。還可用于標(biāo)記活細(xì)胞，用于熒光流式細(xì)胞術(shù)和細(xì)胞功能的顯微研究。
cytocalcein™ violet 450
cytocalcein™ violet 450 (22012) 的激發(fā)和發(fā)射光譜。
cytocalcein™ violet 500
cytocalcein™ violet 500 (22013) 的激發(fā)和發(fā)射光譜
table 2. 用于流式細(xì)胞術(shù)的細(xì)胞鈣素am活性染料的特性產(chǎn)品名稱
分子量
ex/em (nm)
規(guī)格
貨號
cytocalcein™ violet 450 *excited at 405 nm*
～600
406/445 nm
1 mg
22012
cytocalcein™ violet 500 *excited at 405 nm*
517.93
420/505 nm
1 mg
22013
關(guān)鍵詞：流式細(xì)胞儀 熒光酶標(biāo)儀