中華人民共和國農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)
ny/t 1722-2009
蔬菜中敵菌靈殘留量的測定
高效液相色譜法
determination of anilazine residue in vegetables by hplc
前言
本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國農(nóng)業(yè)部種植業(yè)管理司提出。
本標(biāo)準(zhǔn)由全國蔬菜標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會歸口。
本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：農(nóng)業(yè)部蔬菜品質(zhì)監(jiān)督檢驗測試中心（北京）。
本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：趙文、靳松、劉肅、林桓。
1范圍
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了新鮮蔬菜中敵菌靈殘留量的高效液相色譜測定方法。
本標(biāo)準(zhǔn)適用于番茄、菜豆、黃瓜、甘藍、白菜、芹菜、胡蘿卜等蔬菜中敵菌靈殘留量的測定。本標(biāo)準(zhǔn)方法的檢出限為0. 01 mg/kg。
2規(guī)范性引用文件
下列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。
gb/ t 6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法
3原理
在弱酸性條件下用乙腈提取試樣中敵菌靈，加氯化鈉鹽析分層，經(jīng)弗羅里硅土固相萃取柱凈化后，用高效液相色譜儀進行分離。敵菌靈苯環(huán)上的π電子在波長250nm處被激發(fā)，其吸收強度由紫外檢測器檢測。分別記錄標(biāo)樣和試樣的峰高，根據(jù)色譜峰的保留時間定性，外標(biāo)法定量。
4試劑和材料
除非另有說明，在分析中僅使用分析純試劑和gb/ t 6682中規(guī)定的至少二級水。
4.1氯化鈉（naci）。
4.2甲醇（ch3oh）：色譜純。
4.3正己烷（c6h14）：色譜純。
4.4丙酮（c3h6o）：色譜純。
4.5乙腈（ch3cn）：色譜純。
4.6磷酸（h3po4）。
4.7丙酮+正己烷混合溶液（1+19）。
4.8丙酮+正己烷混合溶液（15+85）。
4.9磷酸溶液[ ω（h3po4）= 1%]：稱取10g磷酸（4.6），加水至1 000 ml，搖勻。
4.10敵菌靈標(biāo)準(zhǔn)品：純度≥98%。
4.11敵菌靈標(biāo)準(zhǔn)貯備液：準(zhǔn)確稱取0.1mg敵菌靈標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇（4.2）溶解并轉(zhuǎn)移至100ml容量瓶中，再用甲醇（4.2）定容至刻度，得到質(zhì)量濃度約為1 000 mg/ l的敵菌靈標(biāo)準(zhǔn)貯備液。貯于-20℃~-16℃冰柜中備用。有效期為2個月。
4.12敵菌靈標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：使用時將敵菌靈標(biāo)準(zhǔn)貯備液（4.11）用甲醇（4.2）稀釋得到質(zhì)量濃度為0.5mg/l的敵菌靈標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。有效期為1周。
4.13 0.45μm有機微孔濾膜。
4.14固相萃取柱，填料為弗羅里硅土，容積6ml，填充物1g。
5儀器
5.1高效液相色譜儀，配有紫外檢測器。
5.2分析天平，感量0.1mg和0.01g。
5.3食品加工機。
5.4均質(zhì)器，6 000 r/min~36 000 r/min。
5.5旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。
5.6氮吹儀。
6試樣制備
將蔬菜樣品取可食部分，用干凈紗布輕輕擦去樣品表面的附著物，采用對角線分割法，取對角部分，將其切碎，充分混勻，用四分法取樣或直接放入食品加工機中搗碎成勻漿。勻漿放入容器（除聚氯乙烯材質(zhì)外）中，于-20℃~-16℃條件下保存。稱取試樣前，常溫試樣應(yīng)攪拌均勻，冷凍試樣應(yīng)先解凍再混勻。
7分析步驟
7.1提取
稱取試樣20g（精確至0.01g）于150ml燒杯中，向燒杯中加入1.00ml磷酸溶液（4.9），然后加入50.0 ml乙腈（4.5），高速均質(zhì)約1 min。濾液經(jīng)濾紙過濾至裝有7 g~10 g氯化鈉（4.1）的具塞玻璃試管中，蓋上塞子，劇烈振蕩約1 min，在室溫下靜止2 h以上或使用離心機離心，使得乙腈相和水相充分分層（若有乳化現(xiàn)象，加少量蒸餾水振搖后繼續(xù)分層）。
用移液管準(zhǔn)確吸取10.00ml乙腈提取液至50ml圓底燒瓶中，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上（水浴溫度40℃）濃縮至近干，加入3. 0 ml正己烷（4.3）待凈化。
7.2凈化
依次用3 ml丙酮-正己烷混合溶液（4.7）和4 ml正己烷（4.3）預(yù)淋弗羅里硅土柱，棄去流出液。當(dāng)正己烷液面到達柱吸附層表面時，立即倒入7.1中得到的溶液，用15ml丙酮-正己烷混合溶液（4.8）分三次沖洗燒杯后淋洗弗羅里硅土柱（4.14），用100 ml燒杯接收洗脫液。將盛有洗脫液的燒杯置于氮吹儀上，在水浴溫度40℃條件下，氮吹蒸發(fā)至完（wan）全干燥，用4.00 ml甲醇（4.1）溶解蒸殘物，用微孔濾膜（4.13）過濾至2ml樣品瓶中，待測。
7.3色譜參考條件
7.3.1色譜柱：c18不銹鋼柱，柱長250 mm，內(nèi)徑4. 6 mm，粒徑5μm，或相當(dāng)者。
7. 3.2流動相：a：水，b：乙腈，按表1進行梯度洗脫。
7.3.3柱溫：30℃。
7.3. 4流速：1.0 ml/ min。
7.3.5檢測波長：250 nm。
7.3.6進樣量：10μl。
7.4測定
分別吸取10μl標(biāo)準(zhǔn)溶液和待測液注入高效液相色譜儀中，以保留時間定性，以待測液峰面積與標(biāo)準(zhǔn)溶液峰面積比較定量。
7.5空白實驗
除不稱取試樣外，采用與試樣完（wan）全相同的測定步驟進行平行操作。
8結(jié)果計算
試料中敵菌靈含量用質(zhì)量分數(shù)ω計，單位以毫克每千克（mg/kg）表示，按下列公式計算：
式中：
ρs——標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度，單位為毫克每升（mg/l）；
vs——標(biāo)準(zhǔn)溶液進樣體積，單位為微升（μl）；
v0——試樣溶液最終定容體積，單位為毫升（ml）；
vx——待測液進樣體積，單位為微升（μl）；
as——標(biāo)準(zhǔn)溶液的峰面積；
ax——待測液的峰面積；
m——試料質(zhì)量，單位為克（g）；
f——提取液體積/分取體積；
計算結(jié)果保留兩位有效數(shù)字。
9精密度
在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測試結(jié)果的絕對差值不大于這兩個測定值的算術(shù)平均值的15%。在再現(xiàn)性條件下獲得的兩次獨立測試結(jié)果的絕對差值不大于這兩個測定值的算術(shù)平均值的30%。
10色譜圖
敵菌靈標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖見圖1。