顯微鏡是設(shè)計(jì)以產(chǎn)生太小，用肉眼可以看到的物體或標(biāo)本的放大視覺(jué)或攝影(包括數(shù)字)圖像專(zhuān)門(mén)光學(xué)儀器。 總的來(lái)說(shuō)，工具這個(gè)多樣組不僅包括多個(gè)透鏡( 復(fù)式顯微鏡 )設(shè)計(jì)具有物鏡和聚光鏡，但也包括非常簡(jiǎn)單的單透鏡文書(shū)經(jīng)常手持諸如攝影放大鏡或共同放大鏡。 利用顯微鏡是可以由幾乎任何人都可以很容易地學(xué)會(huì)了熟練程度。即使在開(kāi)關(guān)，過(guò)濾器，旋鈕，滑塊，目鏡銘文和顏色環(huán)上物鏡的復(fù)雜陣列可以是混亂的，它們?nèi)菀自诙虝r(shí)間內(nèi)破譯。 操作的方法是基于約定很少改變，所以一旦一個(gè)新手開(kāi)始理解和運(yùn)用該技術(shù)的基本原理，成功幾乎可以肯定是指日可待。 多年的實(shí)踐，改進(jìn)，主張個(gè)人創(chuàng)意改變標(biāo)準(zhǔn)方法可以終改變初學(xué)者到主顯微鏡。
由于這樣的事實(shí)，大量顯微鏡用戶(hù)的依賴(lài)于試樣的直接觀察，這是極其重要的是理解在顯微鏡和肉眼之間的關(guān)系。 無(wú)論技術(shù)進(jìn)步的，人眼作為視覺(jué)檢測(cè)器(與腦的組合)是曾經(jīng)被遇到的效的圖像處理系統(tǒng)。 有可以在問(wèn)候成像速度和分辨率匹配人眼的能力沒(méi)有人為的設(shè)備。 操作的底層現(xiàn)代照相機(jī)的原理，但是，強(qiáng)烈有關(guān)眼睛的結(jié)構(gòu)和操作(參照?qǐng)D1中的解剖描述)。 與肌肉調(diào)整透鏡一起，角膜的彎曲表面投射的光學(xué)圖象到視網(wǎng)膜(檢測(cè)器)。 入射亮度級(jí)是通過(guò)特定的肌肉的控制下，一個(gè)光圈(很像光學(xué)膜片)的可變直徑控制。 大幅圖像被該柔性透鏡產(chǎn)生的，其中的焦距由另一組的肌肉的改變，使得可聚焦在約20厘米，無(wú)窮大之間的距離的任何物體上。 圖像本身是由約1.3億感光桿細(xì)胞(負(fù)責(zé)識(shí)別的灰度級(jí))和700萬(wàn)感光錐細(xì)胞(顏色識(shí)別)在視網(wǎng)膜上檢測(cè)到的，并隨后通過(guò)視神經(jīng)傳送到大腦沿著短的路徑。
在圖2中的形式示出的30度視角的光線(xiàn)以證明對(duì)人眼的適應(yīng)為在不同的距離觀看對(duì)象。 在這種情況下，一個(gè)飛行鴨在50米的距離觀察而附近的蝴蝶在25厘米的更接近的距離觀看。 在接近眼睛對(duì)象不能有它們的圖象被聚焦在視網(wǎng)膜上的，因?yàn)檠劬Φ木铙w的改變其形狀的能力有限。 此外，它是不實(shí)際的得到任何距離小于大約10厘米由于被觀看到該視場(chǎng)角變得非常小的事實(shí)，這就是為什么許多細(xì)節(jié)是無(wú)法辨認(rèn)的對(duì)象。 例如，如果你想擁有在居住在植物的莖細(xì)的毛細(xì)血管仔細(xì)一看(見(jiàn)圖3)，你將削減一個(gè)極薄的薄片從根兒，將其放置在顯微鏡載玻片上，并使用保護(hù)它蓋玻片(如在圖3(a)所示)。 即便如此，當(dāng)你持有的成品樣品拿到燈光，你會(huì)發(fā)現(xiàn)很多細(xì)節(jié)留給顯露出來(lái)。 你想看到有一個(gè)直徑只有百分之一或一毫米的甚至千分之一，使他們無(wú)法從這樣一個(gè)偉大的距離來(lái)識(shí)別，因?yàn)橐暯翘。?xì)節(jié)達(dá)到視網(wǎng)膜上不同的受體的很多復(fù)雜的功能。 類(lèi)似的情況結(jié)果時(shí)，我們?cè)噲D在200米的距離，觀察鴨子。 在當(dāng)前鳥(niǎo)的翅膀在很多復(fù)雜的細(xì)節(jié)和彩色斑紋不能從這樣一個(gè)很大的距離，因?yàn)榭梢暯嵌忍”蛔R(shí)別。 植物莖的放大圖示于圖3的(b)來(lái)說(shuō)明復(fù)式顯微鏡的倍率。
倍率概念
五百年前，簡(jiǎn)單的玻璃放大鏡開(kāi)發(fā)，以協(xié)助觀察非常小的物體。 這樣的儀器由一個(gè)或多個(gè)凸透鏡，允許樣本或?qū)ο蟊欢ㄎ辉谒鰧?duì)象和眼睛之間的放大鏡聚焦(在中心比周邊更厚)。 有時(shí)被稱(chēng)為簡(jiǎn)單的顯微鏡 ，他們通過(guò)增加視網(wǎng)膜上的視覺(jué)角度的處理上顯示放大倍數(shù)由視網(wǎng)膜上的圖像。 圖4表示的是如何簡(jiǎn)單雙凸透鏡操作的圖示。 圖像通過(guò)眼睛，好像它是在10英寸或25厘米(參考，或常規(guī)觀看距離)的距離感知。 雖然試樣的圖像似乎是在透鏡作為試件本身的同一側(cè)，它不能被投射到屏幕上。 這些圖像被稱(chēng)為虛擬映像和他們出現(xiàn)直立不倒。在一個(gè)復(fù)式顯微鏡，圖像顯示在空間中漂浮的正下方的觀測(cè)管的頂部(在目鏡的固定光闌的水平)，其中目鏡插入。 你所觀察到的是不是有形的; 它不能被掌握。 相反，它是一個(gè)地圖或各種顏色和/或從黑到白的灰色陰影的試樣的代表性。
超過(guò)8倍或10倍的倍率不與由于視圖所得小字段的簡(jiǎn)單雙凸透鏡和事實(shí)的透鏡必須進(jìn)入非常接近眼睛非常有用的。 為了實(shí)現(xiàn)我們必須使用復(fù)式式顯微鏡，它初是由荷蘭和伽利略詹森兄弟開(kāi)發(fā)了意大利各地的1600年初高放大倍率。 在其的形式中，該儀器是由串聯(lián)排列兩個(gè)凸透鏡：更靠近物體或標(biāo)本，和目鏡(目鏡)透鏡更靠近觀察者的眼睛的對(duì)象的玻璃(通常稱(chēng)為物鏡)(附裝置調(diào)節(jié)所述試樣和顯微鏡透鏡)的位置。 復(fù)式顯微鏡實(shí)現(xiàn)兩階段倍率其中物鏡投影放大圖像到顯微鏡和目鏡進(jìn)一步的主體管放大投影的圖像。 總放大倍數(shù)等于物鏡乘以目鏡的放大倍數(shù)的放大倍數(shù)：
總放大倍率=物鏡放大倍數(shù)×目鏡放大倍率
早的復(fù)式顯微鏡是由光學(xué)像差(包括色差和球面)阻礙。 這些缺陷從白光是由無(wú)數(shù)的波長(zhǎng)，并且當(dāng)光波穿過(guò)透鏡的周邊，它們不與那些通過(guò)中心帶入焦點(diǎn)的事實(shí)造成的。 早期顯微鏡產(chǎn)生的圖像經(jīng)常被用彩色暈?zāi)：钡?8世紀(jì)中期透鏡制造商發(fā)現(xiàn)，通過(guò)組合由玻璃制成具有不同顏色的分散體的兩個(gè)透鏡，大部分的色差可被減少或消除。 現(xiàn)代顯微鏡通常與用于不同物鏡的可互換部件模塊化，并且可以有多個(gè)透鏡布置成一個(gè)在另一個(gè)后面，從而允許多達(dá)2000倍和更高的，并產(chǎn)生了顯著的清晰度和對(duì)比度的圖像的能力的倍率。
示出在圖5中的蔡司無(wú)限遠(yuǎn)顏色校正光學(xué)系統(tǒng)（ics）的具有現(xiàn)代顯微鏡設(shè)有管透鏡作為物鏡加入支持使用原理。 在顯微鏡光束路徑(圖5的(a))，該對(duì)象或樣品被物鏡記錄和在無(wú)窮首先投射與波前或射線(xiàn)的平行束。 實(shí)際上，該光線(xiàn)從物鏡后面直線(xiàn)，平行線(xiàn)的檢體旅行的一個(gè)點(diǎn)始發(fā)。 管透鏡然后以類(lèi)似的方式的功能的相機(jī)聚焦平行射線(xiàn)束，從而產(chǎn)生位于所述目鏡內(nèi)部在其前焦平面的放大中間圖像。 目鏡，充當(dāng)?shù)诙糯箸R，轉(zhuǎn)換中間圖像的成平行光線(xiàn)的尺寸。 精密的復(fù)式顯微鏡系統(tǒng)的所得視野角比從直接觀察(圖5的(b))，其中該對(duì)象是直接從大約25厘米的距離看到結(jié)果大得多。 其中這些平行束相交的區(qū)域被稱(chēng)為眼點(diǎn) ，而這正是在眼睛的虹膜應(yīng)設(shè)。 角膜和眼睛的透鏡集中這些平行光線(xiàn)在視網(wǎng)膜上。 如上所述，總放大倍數(shù)等于物鏡放大倍率乘以目鏡倍率。 在此說(shuō)明性示例中，在顯微鏡的整體放大率是100×(10倍的物鏡用10倍目鏡)。
在選定的數(shù)值孔徑(物鏡乘以成像介質(zhì)的折射率的角孔徑的正弦)，其中所述顯微鏡呈現(xiàn)的放大圖像與幅度相當(dāng)于人眼的分辨率極限的，進(jìn)一步放大超過(guò)這點(diǎn)不會(huì)導(dǎo)致更精細(xì)的標(biāo)本細(xì)節(jié)的分辨率。 為物鏡和目鏡組合有用總放大倍數(shù)的范圍是由系統(tǒng)的數(shù)值孔徑限定。 有對(duì)由眼睛來(lái)解決必要的圖像中存在的的細(xì)節(jié)的小放大率，并且該值通常設(shè)置在數(shù)值孔徑500倍（500×na）。 在光譜的另一端，一個(gè)圖像的大有用倍率通常設(shè)置在數(shù)值孔徑1000倍（1000×na）。 此限制是由衍射強(qiáng)加于物鏡光的波動(dòng)性設(shè)置。 高于此值倍率會(huì)產(chǎn)生圖像細(xì)節(jié)更精細(xì)的分辨率沒(méi)有其他有用信息，而且通常會(huì)導(dǎo)致圖像質(zhì)量下降。 超出有效的放大倍數(shù)的限制導(dǎo)致圖像從空的放大倍率 ，其中通過(guò)目鏡或中間管鏡頭的放大倍率增加僅使圖像變得與細(xì)節(jié)分辨率沒(méi)有相應(yīng)的增加了更多患放大。
倍率這些基本原理背后的復(fù)式顯微鏡的操作和結(jié)構(gòu)。 這些原理的闡述已導(dǎo)致發(fā)展，在過(guò)去的幾百年，今天能夠從低生產(chǎn)高品質(zhì)的圖像，以高倍率的精密儀器。
在光學(xué)顯微鏡下，當(dāng)來(lái)自照明源的光通過(guò)聚光，然后通過(guò)樣品，一些光通過(guò)這兩個(gè)周?chē)?，并通過(guò)在其路徑不受干擾試樣。 該光稱(chēng)為直接 ，非偏移 或非衍射光，和表示背景光。 一些光與樣品相互作用的偏離或衍射。 衍射光呈現(xiàn)半波長(zhǎng)或180度的相位與已經(jīng)沒(méi)有遇到障礙物穿過(guò)直射光。 的二分之一波長(zhǎng)的相位差，所引起的試樣本身，使該光以引起與直接光消干涉時(shí)都在位于目鏡的固定光闌的中間像平面到達(dá)。 目鏡的眼透鏡進(jìn)一步放大這個(gè)圖像，終投射到視網(wǎng)膜上，照相機(jī)的膠片平面，或光敏感的數(shù)字圖像傳感器的表面上。
現(xiàn)在的情況是，直接或非偏移光由物鏡投影并在目鏡的膜片在整個(gè)圖象平面中均勻分布。 由檢體衍射的光發(fā)生干涉在物鏡后焦平面(見(jiàn)圖1)和被帶入焦點(diǎn)以各種局部地方相同的圖像平面上，其中，所述衍射光產(chǎn)生破壞性干擾，并降低強(qiáng)度，造成一個(gè)產(chǎn)生上含灰度值從非常暗到非常亮的廣泛模式。 亮和暗的這些模式是我們承認(rèn)作為標(biāo)本的圖像。 因?yàn)槲覀兊难劬υ诹炼茸兓舾?，圖像變得原始試樣的或多或少忠實(shí)重建。
為了幫助理解成像的基本原理，建議讀者嘗試以下的運(yùn)動(dòng)，并使用公知的周期性結(jié)構(gòu)的對(duì)象作為樣品。 這些實(shí)驗(yàn)是容易使用的一個(gè)階段微米或密集的暗線(xiàn)類(lèi)似光柵進(jìn)行。 要繼續(xù)，將精細(xì)刻劃光柵顯微鏡載物臺(tái)上，并使用10倍，然后40倍的物鏡，使其焦點(diǎn)。 卸下目鏡，并且在它的位置，插入一個(gè)相位望遠(yuǎn)鏡這樣可以觀察到物鏡的后側(cè)焦點(diǎn)面。 如果聚光鏡孔徑光闌閉合大多數(shù)的方式，光的明亮的白色*點(diǎn)會(huì)出現(xiàn)在物鏡，這是孔徑光闌的圖像的后部。 向右側(cè)和左側(cè)的*點(diǎn)的，一系列衍射譜(也孔徑光闌的圖像;在圖1中呈現(xiàn))的將存在，每個(gè)彩色藍(lán)色到*點(diǎn)的部分，而位于該部分紅色從*亮點(diǎn)頻譜遠(yuǎn)(如示于圖2)。 這些有色光譜的強(qiáng)度根據(jù)多遠(yuǎn)頻譜從*點(diǎn)位于減小。
落在物鏡的外周附近的那些衍射譜比更靠近*點(diǎn)的調(diào)光器。 在圖2所示的衍射光譜使用三種不同的物鏡放大率捕獲。 在圖2(b)中，在10倍的物鏡的后側(cè)焦點(diǎn)面可見(jiàn)的衍射圖案包含兩個(gè)衍射光譜。 如果光柵被從階段除去，如在圖2(a)所示，這些光譜消失，僅孔徑光闌的中心圖像保持。 如果光柵被重新插入，光譜再次出現(xiàn)。 需要注意的是彩色光譜之間的空間顯得較暗。 如果光柵與10x物鏡觀察可以觀察到只有一對(duì)光譜。 在這種情況下，一個(gè)衍射斑點(diǎn)出現(xiàn)在左邊，一個(gè)出現(xiàn)在中心孔開(kāi)口的右側(cè)。 如果行光柵是用40×物鏡檢查(如圖2的(c))，幾衍射光譜出現(xiàn)在中心孔的左側(cè)和右側(cè)。 當(dāng)倍率增加到60倍或63×(并假設(shè)它具有較高的數(shù)值孔徑比40x物鏡)，幾個(gè)另外的光譜(參見(jiàn)圖2(d))的出現(xiàn)，以左，右的那些與40x物鏡可見(jiàn)的到位。
因?yàn)楫?dāng)光柵除去有色光譜消失，則可以假定這是通過(guò)影響光通過(guò)，由此產(chǎn)生的著色光譜檢體本身。 此外，如果孔徑光闌關(guān)閉到一個(gè)非常小的開(kāi)口尺寸，我們將看到，更高的數(shù)值孔徑的物鏡掌握多種這些有色光譜的比做低數(shù)值孔徑的物鏡。 這兩個(gè)概念對(duì)理解圖像形成的重要性將成為隨后的段落清晰。 光的中心光點(diǎn)(聚光鏡孔徑光闌的圖像)表示直接或非偏移光穿過(guò)樣品或原狀的樣品周?chē)?在圖3(b)所示)。 這就是所謂的第0或零級(jí)。 上零級(jí)的各側(cè)的孔徑光闌的較暗圖像被稱(chēng)為，第二，第三，第四，等等分別訂單，如由模擬衍射圖案如圖3(a)表示，這將在被觀察40倍的物鏡后焦平面。 所有捕獲命令表示，在這種情況下，線(xiàn)光柵作為在物鏡的后焦平面可見(jiàn)的衍射圖案。
孔徑光闌的微弱衍射圖像是由衍射波前引起的，在扇形散開(kāi)，在各線(xiàn)光柵的開(kāi)口(如圖3(b))。 藍(lán)色波長(zhǎng)比綠色波長(zhǎng)，這是在比紅的波長(zhǎng)更小的角度衍射的更小的角度衍射。 在物鏡的后焦平面，從每個(gè)狹縫藍(lán)色波長(zhǎng)干涉建設(shè)性地產(chǎn)生每個(gè)光譜或命令的衍射圖像的藍(lán)色區(qū)域。 紅色和綠色的區(qū)域(圖3的(a))被隔開(kāi)的位進(jìn)一步，但是從同樣的現(xiàn)象發(fā)生。 其中，衍射波長(zhǎng)的一半波為每個(gè)這些顏色步驟的，海浪消干涉，以產(chǎn)生光譜或命令之間的暗區(qū)。 在零階的位置，從每個(gè)狹縫所有波長(zhǎng)建設(shè)性添加。 這產(chǎn)生你看到的第零級(jí)的明亮的白色光(參見(jiàn)圖2，3和4)在物鏡的后焦平面的中心。
行的更接近的間隔光柵，光譜越少，將通過(guò)給定的物鏡被捕獲，如在圖4(交流)示出。 在圖4所示的衍射圖(a)用40x物鏡成像的下部的線(xiàn)在如圖4(b)，其中所述狹縫靠得更近光柵捕獲。 在圖4(c)中，物鏡聚焦于線(xiàn)光柵的上部(圖4的(b))，其中狹縫是相隔較遠(yuǎn)，并且更光譜由物鏡捕獲。 的直接光，并從更高階的衍射大值的光被物鏡聚焦在目鏡的固定光闌，以在中間像平面的圖像。 這里的直接和衍射的光線(xiàn)干涉，并從而重建成由所述目鏡的眼透鏡看到和進(jìn)一步放大了真實(shí)，倒象。 這在圖4(d)通過(guò)圖4(g)與兩種類(lèi)型的衍射光柵的說(shuō)明。 在圖4(d)所示的正方形網(wǎng)格代表網(wǎng)格的無(wú)畸變圖象(實(shí)際上，通常的檢體圖像通過(guò)目鏡觀察到的)通過(guò)物鏡的全孔徑看到。 從該網(wǎng)格導(dǎo)出的衍射圖案被示為將在物鏡的后焦平面(圖4(e))的可見(jiàn)一個(gè)錐光圖像。 同樣地，一六角形排列格子的無(wú)畸變圖象(圖4(f))的產(chǎn)生的一階衍射圖案的相應(yīng)六角形排列錐光圖像(圖4(g))。
衍射光及解
顯微鏡標(biāo)本可以被認(rèn)為是與細(xì)節(jié)和開(kāi)口跨越大范圍的尺寸的復(fù)雜的線(xiàn)或圖案的光柵。 成像的概念在很大程度上是由阿貝，19世紀(jì)德國(guó)著名的顯微鏡和光學(xué)理論家發(fā)展。 根據(jù)阿貝(他的理論仍然被廣泛地在目前的時(shí)間接受)，如果物鏡捕捉2個(gè)數(shù)量的光的，諸如光衍射的1階和至少第0級(jí)的檢體的細(xì)節(jié)將得到解決。 衍射級(jí)是獲準(zhǔn)進(jìn)入物鏡的數(shù)量越多，越準(zhǔn)確的圖像將代表原始對(duì)象。 此外，如果折射率高于空氣(如浸油)的介質(zhì)中的空間中使用的物鏡的前透鏡和蓋玻片頂部之間(如所示用于干物鏡在圖5(a))的的衍射級(jí)的角度被減小，衍射光的風(fēng)扇將被壓縮。 其結(jié)果是，一個(gè)油浸物鏡可以捕獲更多衍射級(jí)和比干物鏡(圖5(b))的產(chǎn)生更好的分辨率。 比較所捕獲的訂單在圖5(a)和5(b)中。 此外，由于藍(lán)色光以比綠色光或紅色光的較小角度衍射，給定孔徑的透鏡可以捕捉的光的更多的訂單時(shí)，波長(zhǎng)在可見(jiàn)光譜的藍(lán)色區(qū)域。 這兩個(gè)原理解釋經(jīng)典的瑞利方程經(jīng)常被引用作為計(jì)算在顯微鏡點(diǎn)至點(diǎn)分辨率的基礎(chǔ)：
d(分辨率)= 1.22•(λ/2na)
其中，d是兩個(gè)相鄰的顆粒(還允許顆粒被感知為獨(dú)立的)之間的空間中，λ是照明的波長(zhǎng)，na是物鏡的數(shù)值孔徑。 假定在顯微鏡還裝有具有相同的數(shù)值孔徑的物鏡的聚光鏡(沒(méi)有聚光鏡，分辨率將是一半好導(dǎo)致分辨細(xì)節(jié)的兩倍大)。 允許進(jìn)入物鏡更高衍射級(jí)的數(shù)量越多，可被清楚地分離或拆分試件的細(xì)節(jié)越小。 此處是采用高數(shù)值孔徑物鏡用于檢查在各個(gè)試樣的小可能的信息的值。 同樣地，可見(jiàn)光的使用的波長(zhǎng)越短，分辨率越高。 這些想法解釋為什么高數(shù)值孔徑，復(fù)消色差透鏡可以單獨(dú)在藍(lán)光極小的細(xì)節(jié)。 在物鏡塊的外衍射級(jí)的后面放置一個(gè)遮光掩膜。 這會(huì)減小光柵線(xiàn)的分辨率，或任何其他檢體的細(xì)節(jié)，或它*破壞了分辨率，以使試樣不可見(jiàn)。 因此，通常小心不要關(guān)閉下面物鏡的孔徑的建議的三分之二聚光鏡孔徑光闌。
物鏡的故障把握在未解決的圖像的衍射級(jí)的結(jié)果的一個(gè)以上。 在具有非常微小的細(xì)節(jié)的檢體中，衍射風(fēng)扇以一個(gè)非常大的角度傳播，需要高數(shù)值孔徑物鏡捕獲它們。 同樣，由于衍射球迷在浸油或水的壓縮，專(zhuān)為這種用途物鏡可以給比干物鏡更高的分辨率。如果備用衍射級(jí)不被改變(仍假定光柵作為我們的樣品)，在光柵的行數(shù)會(huì)出現(xiàn)加倍(寄生分辨率)。 重要的警告是在物鏡的介紹后實(shí)際行動(dòng)產(chǎn)生確定的終圖像。 在檢體的小細(xì)節(jié)(相對(duì)于線(xiàn)光柵)，物鏡的直接和衍射光投射到目鏡光闌的像平面中的稱(chēng)作艾里斑小的，圓的衍射圖案的形式(在圖6所示) 。高數(shù)值孔徑物鏡捕獲更多的衍射級(jí)的生產(chǎn)更小尺寸磁盤(pán)將比低數(shù)值孔徑的物鏡。 在圖6中，示出艾里斑大小從圖6(a)至圖6的(c)穩(wěn)定下降。 在圖6中的較大磁盤(pán)大小(a)和(b)中通過(guò)以較低的數(shù)值孔徑物鏡產(chǎn)生的，而在圖6(c)該非常尖銳艾里斑是由非常高的數(shù)值孔徑的一個(gè)物鏡產(chǎn)生的。
在目鏡膜片水平所產(chǎn)生的圖像實(shí)際上是被認(rèn)為是樣品的亮和暗區(qū)域艾里磁盤(pán)的鑲嵌。 如果兩盤(pán)非常接近，他們的核心亮點(diǎn)交叉重疊，這些重疊的圓盤(pán)所代表的兩個(gè)細(xì)節(jié)都沒(méi)有解決或分離，從而表現(xiàn)為一個(gè)(如圖6所示(e))。 與此相反，在圖6(d)所示的艾里斑只是足夠遠(yuǎn)，以得到解決。 要記住的基本原理是，直接和衍射光(或直接或衍射光的操縱)的組合是在圖像形成至關(guān)重要。 對(duì)于這種操縱的關(guān)鍵位置是物鏡的后側(cè)焦點(diǎn)面和聚光鏡的前焦平面。 這個(gè)原理就是從根本上大部分的光學(xué)顯微鏡對(duì)比改進(jìn)方法。 更重要的是，它是在高放大倍率特別重要的小細(xì)節(jié)關(guān)閉大小的光的波長(zhǎng)。 阿貝在開(kāi)發(fā)這些概念來(lái)解釋的光吸收或幅度標(biāo)本成像的。