一、真菌dna的提取（方法一）
1.實驗試劑
（1）dna提取液：0.2m tris-hcl（ph 7.5），0.5m nacl，0.01m edta，1％sds
（2）3m naac
（3）te：10 mmol/l tris-hcl ph8.0，1 mmol/l edta
（4）酚（ph8.0）:氯仿:異戊醇（25:24:1）
（5）氯仿:異戊醇（24:1）
（6）異丙醇
（7）無水乙醇
（8）75%乙醇
（9）rnasea
2.實驗步驟
（1）取真菌菌絲0.5g, 在液氮中迅速研磨成粉
（2）加入4ml提取液，快速振蕩混勻
（3）加入等體積的4ml的氯仿:異戊醇（24:1），渦旋3～5min（此處是粗提沒有加酚，可以節(jié)約成本）
（4）1000rpm，4℃，5min
（5）上清用氯仿:異戊醇（24:1）再抽提一次（10,000rpm，4℃離心5min）
（6）取上清，加入2/3倍體積的-20℃預(yù)冷異丙醇或2.5倍體積的無水乙醇沉淀, 混勻, 靜置約30 min
（7）用毛細玻棒挑出絮狀沉淀，用75%乙醇反復(fù)漂洗數(shù)次，再用無水乙醇漂洗1次，吹干，重懸于500ul te中
（8）加入1ul rnasea （10mg/ml），37℃處理1h
（9）用酚（ph8.0）:氯仿:異戊醇（25:24:1）和氯仿:異戊醇（24:1）各抽提1次（10,000rpm，4℃離心5min）
（10）取上清，1/10v 3m naac，2.5v體積的無水乙醇，-70℃沉淀30min以上
（11）沉淀用75%乙醇漂洗，風(fēng)干，溶于200ul te中，-20℃保存?zhèn)溆?br>二、真菌dna的提取（方法二）
1.真菌菌絲0.5-1g，在液氮中迅速研磨成粉
2.加入3ml 65℃預(yù)熱的dna提取緩沖液，快速振蕩混勻65℃水浴30min，期間混勻2-3次
3.加入1ml 5m kac，冰浴20min
4.氯仿:異戊醇（24:1）抽提1次（10,000rpm，4℃離心5min）
5.取上清，加入2/3倍體積的-20℃預(yù)冷異丙醇，混勻，靜置約30 min
6.用毛細玻棒挑出絮狀沉淀，用75%乙醇反復(fù)漂洗數(shù)次，再用無水乙醇漂洗1次，吹干，重懸于500ul te中
7.加入1ul rnasea（10mg/ml），37℃處理1h
8.用酚（ph8.0）:氯仿:異戊醇（25:24:1）和氯仿:異戊醇（24:1）各抽提1次（10,000rpm，4℃離心5min）
9.取上清，1/10v 3m naac，2.5v體積的無水乙醇，-70℃沉淀30min以上
10.沉淀用75%乙醇漂洗，風(fēng)干，溶于200ul te中，-20℃保存?zhèn)溆?br>dna提取緩沖液：100mm tris-hcl（ph8.0），20mm edta（ph8.0），1.5m nacl，2% ctab（w/v），4% pvp40（w/v）和2%巰基乙醇（v/v），pvp和巰基乙醇使用前加入5m kac
方法一和二，是大同小異。主要是dna提取液配方不一樣！成本也不一樣！
三、真菌菌絲的總rna的提取
1.實驗試劑
（1）rna提取緩沖液（ctab）：2% ctab（w/v），2% 聚乙烯吡咯烷酮pvp（w/v），100mm tris-hcl（ph8.0,depc處理的水配置），25mm edta，0.5g/l 亞精胺spermidine，2.0m nacl，2%巰基乙醇（v/v，使用前加入）。由于在高溫滅菌條件下，tris-hcl要和depc發(fā)生反應(yīng)，所以配rna提取緩沖液時直接用depc處理的水配制即可
（2）sste：1 m nacl，0.5% sds（w/v），10mm tris-hcl ph8.0，1.0mm edta
（3）10m licl 直接用蒸餾水配10m licl，加1‰的depc過夜后，高溫滅菌
（4）3m naac
（5）氯仿:異戊醇（24:1）
（6）酚（ph4.5）:氯仿:異戊醇（25:24:1）
（7）depc處理水 用1‰的depc處理蒸餾水過夜，高溫滅菌
（8）無水乙醇；70%酒精
2.實驗步驟
（1）實驗開始前將rna提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱，離心管中加入me（巰基乙醇），（10ml加80ul，50ml中加入300ul）
（2）取約0.8g菌絲體（液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養(yǎng)就更好說了），在液氮中迅速磨成精細粉末，裝入50ml離心管，按1g材料8ml的量加入預(yù)熱的rna提取液，顛倒混勻
（3）65℃水浴3-10 min，期間混勻2-3次
（4）加入等體積的酚（注意是酸酚ph4.5）:氯仿:異戊醇（25:24:1）抽提（10,000rpm，4℃，5 min）
（5）取上清，等體積的氯仿:異戊醇（24:1）抽提（10,000rpm，4℃，5 min）
（6）加入1/4v體積10m licl溶液，4℃放置6h以上（或過夜）
（7）10,000rpm，4℃離心20min
（8）棄上清，用500ul sste溶解沉淀
（9）酚:氯仿:異戊醇（25:24:1）抽提兩次，氯仿:異戊醇（24:1）抽提1次（10,000rpm，4℃，5min）
（10）加2v體積的無水乙醇，在-70℃冰箱沉淀30min以上
（11）12,000rpm，4℃離心20 min
（12）棄上清。沉淀用70%酒精漂洗一次，干燥
（13）加200ul的depc處理水溶解
（14）用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測rna的質(zhì)量
（在抽提過程中，若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多，可以增加抽提次數(shù)）
注意：提取rna請盡量在低溫下操作，如果條件不容許，在室溫下操作的時間要盡可能的短。
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