詳談ELISA試劑盒HRP底物分類

發(fā)布時(shí)間:2024-03-16
elisa試劑盒靈敏性判斷的話,因?yàn)楦鞣Nelisa試劑盒的機(jī)能之間沒有明顯的水平差異,但是在inbios試劑盒檢測(cè)到的數(shù)據(jù)體現(xiàn)愈甚的原尺度低(p / n <10)以及介質(zhì)(10≤p / n <20)cdc jev igm抗體陽(yáng)性標(biāo)本的xcyton套件。不亂性包含長(zhǎng)期不亂性,開蓋不亂性,運(yùn)輸不亂性,有必要還要添加熱加速不亂性等。拿核酸類試劑來(lái)說,敏捷度有的時(shí)候叫*低檢測(cè)線,就是拿一個(gè)已知濃度樣本稀釋下去,直到試劑盒檢測(cè)不出來(lái)為止,從而得到該試劑盒敏捷度到什么程度,特異性就是用該試劑盒檢測(cè)與目的病原微生物在相同感染部位的陰性樣本,檢測(cè)試劑盒是否泛起假陽(yáng)性結(jié)果,精密型比較簡(jiǎn)樸,檢測(cè)一份接近但高于*低檢測(cè)線樣本重復(fù)十次,計(jì)算cv值,一般核酸類試劑要求小于5%,酶免不清晰。 假如要判定elisa試劑盒的敏捷度,樣品應(yīng)該著眼于四周的疾病預(yù)防控制中央的數(shù)據(jù)為根據(jù),對(duì)試劑盒的敏捷度進(jìn)行了分析,通過對(duì)比套件結(jié)果與cdc日本腦炎病毒igm抗體陽(yáng)性的結(jié)果,以及從疾病的發(fā)病樣品采集的天數(shù)分類,有著明顯的機(jī)能差異。通過試劑盒的檢測(cè)結(jié)果與cdc日本腦炎病毒igm抗體陽(yáng)性的結(jié)果進(jìn)行了對(duì)比確定的尺度:分為低、中、高,其主要依據(jù)是看比例。
底物范圍較廣,包括二氨基聯(lián)苯胺(dab)、氯萘酚和氨乙基咔唑等。hrp底物范圍較廣,包括二氨基聯(lián)苯胺(dab)、氯萘酚和氨乙基咔唑等。
一、二氨基聯(lián)苯胺/金屬鹽
dab是辣根過氧化物酶最敏感、常用的底物。它產(chǎn)生強(qiáng)烈的棕色產(chǎn)物,在水和醇中不溶解。多數(shù)情況下,推薦在dab中加入不同的金屬離子。當(dāng)加入金屬鹽如鈷、鎳至底物液中,辣根過氧化物酶可以更加敏感。此類反應(yīng)產(chǎn)物呈暗藍(lán)灰色至黑色,且在水及醇中穩(wěn)定。dab/金屬鹽染色應(yīng)用的組織染色范圍較廣。
1. 需要的溶液和特殊設(shè)備
dab,0.05 mol/ltris緩沖液(ph7.6),0.3% (w/v) 氯化鎳/水貯存液,30%過氧化氫,dpx,光學(xué)顯微鏡(通常帶有照相機(jī)以便于記錄結(jié)果).
2. 操作步驟
(1) 用 9 ml 0.05 mol/l tris緩沖液(ph7.6)溶解6 mg dab;
(2) 加 l ml 0.3%(w/v)氯化鎳/水貯存液(也可以用等量的氯化鈷替代);
(3) 加0.1 ml 3%過氧化氫。過氧化氫一般以30%的溶液提供,貯存在4 ℃,此條件可以持續(xù)1個(gè)月;
(4) 如果出現(xiàn)沉淀,用濾紙過濾;
(5) 加此溶液至標(biāo)本,并孵育1~20 min水洗終止反應(yīng);
(6) 優(yōu)化:如果需要可復(fù)染;
(7) 用dpx封片。
二、氯萘酚
氯萘酚可以形成一種藍(lán)黑色產(chǎn)物。敏感性低于dab,且產(chǎn)物可溶于醇中。它適用于當(dāng)dab反應(yīng)形成較高背景或要求改變產(chǎn)物的顏色。
1. 需要的溶液和特殊設(shè)備
0.03%氯萘酚,用無(wú)水乙醇溶解(貯存在-20℃),0.05 mol/ltris(ph7.6),過氧化氫,gelvatol或者mowiol,光學(xué)顯微鏡(通常帶有照相機(jī)以便于記錄結(jié)果)。
2. 操作步驟
(1) 氯萘酚貯存液的準(zhǔn)備:用10 ml無(wú)水乙醇溶解0.3 g氯萘酚,貯存于-20℃;
(2) 加100μl 氯萘酚貯存液至10 ml 0.05 mol/ltris(ph7.6);
(3) 加0.1 ml 3%過氧化氫于水中。過氧化氫一般是以30%的溶液提供,4℃可存放1個(gè)月;
(4) 白色沉淀可用濾紙過濾去除;
(5) 加此溶液到標(biāo)本中,并在室溫孵育10~40 min,水洗終止反應(yīng);
(6) 優(yōu)化:如果需要,進(jìn)行復(fù)染,但只可使用水溶性染料;
(7) 用gelvatol或者mowiol封片。
三、氨乙基咔唑
氨乙基咔唑(aec)產(chǎn)生紅色產(chǎn)物,其敏感性低于dab,但可用于dab反應(yīng)產(chǎn)生較高背景或要求改變產(chǎn)物顏色的實(shí)驗(yàn)。此產(chǎn)物可溶于醇,但不溶于水。
1. 需要的溶液和特殊設(shè)備
0.4% aec用 n,n—二甲基甲酰胺(dmf)溶解, 0.1 mol/l乙酸鈉緩沖液(ph5.2),過氧化氫, gelvatol或mowiol,光學(xué)顯微鏡(通常帶有照相機(jī)以便于記錄結(jié)果)。
2. 操作步驟
(1) 用 l ml dmf溶解 4 mg aec。aec在dmf中穩(wěn)定,因此,可以用100 ml dmf溶解0.4 g aec作為貯存液備用;
(2) 加 l ml aec溶液至15 ml 0.1 mol/l的乙酸鈉緩沖液(ph5.2)中,并攪拌;
(3) 加0.15 ml 3%過氧化氫于水中。過氧化氫一般是30%的溶液提供,在4℃可存放1個(gè)月;
(4) 用濾紙過濾;
(5) 加此溶液到標(biāo)本中,并于室溫孵育10~40 min,水洗終止反應(yīng);
(6) 優(yōu)化:如果需要復(fù)染,只可用水溶性染料;
(7) 用gelvatol或mowiol封片。
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