當(dāng)重要的人源細(xì)胞培養(yǎng)污染時(shí),研究者可能試圖消除或控制污染。首先,確定污染物是細(xì)菌、真菌、支原體或酵母,把污染細(xì)胞與其它細(xì)胞系隔離開(kāi),用實(shí)驗(yàn)室消毒劑消毒培養(yǎng)器皿和超凈臺(tái),檢查hepa過(guò)濾器。
高濃度的抗生素和抗霉菌素可能對(duì)一些細(xì)胞系有毒性,因而,做劑量反應(yīng)實(shí)驗(yàn)確定抗生素和抗霉菌素產(chǎn)生毒性的劑量水平。這點(diǎn)在使用抗生素如*和抗霉菌素如泰樂(lè)菌素時(shí)尤其重要。下面是推薦的確定毒性水平和消除培養(yǎng)污染的實(shí)驗(yàn)步驟。
①在無(wú)抗生素的培養(yǎng)基中消化、計(jì)數(shù)和稀釋細(xì)胞,稀釋到常規(guī)細(xì)胞傳代的濃度。
②分散細(xì)胞懸液到多孔培養(yǎng)板中,或幾個(gè)小培養(yǎng)瓶中。在一個(gè)濃度梯度范圍內(nèi),把選擇抗生素加入到每一個(gè)孔中。例如,*推薦下列濃度,0.25,0.50,1.0,2.0,4.0,8.0 mg/ml。
③每天觀測(cè)細(xì)胞毒性指標(biāo),如脫落,出現(xiàn)空泡,匯合度下降和變圓。
④確定抗生素毒性水平后,使用低于毒性濃度2-3倍濃度的抗生素的培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞2-3代。
⑤在無(wú)抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞一代。
⑥重復(fù)步驟4。
⑦人源細(xì)胞在無(wú)抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)4-6代,確定污染是否以已被消除。
67-56-1 methyl alcohol 甲醇標(biāo)準(zhǔn)品 3x1.5ml
111-42-2 diethanolamine 二乙醇胺標(biāo)準(zhǔn)品 3ml
102-71-6 三乙醇胺標(biāo)準(zhǔn)品 3ml
曲沃前列素標(biāo)準(zhǔn)品 3ml
帕立骨化醇溶液標(biāo)準(zhǔn)品 3ml
134-62-3 diethyltoluamide 避蚊胺標(biāo)準(zhǔn)品 3g
8031-42-3 digitalis 洋地黃標(biāo)準(zhǔn)品 3g
67-68-5 dimethyl sulfoxide 二甲基亞砜標(biāo)準(zhǔn)品 3g
868-14-4 potassium bitartrate (as) 酒石酸氫鉀標(biāo)準(zhǔn)品 3g
144-55-8 sodium bicarbonate (as) *標(biāo)準(zhǔn)品 3g
100986-89-8 左*相關(guān)物質(zhì)b標(biāo)準(zhǔn)品 35mg
人源細(xì)胞