邁迪安的可風(fēng)干植物直擴(kuò)qpcr預(yù)混液(mdx116)是一種無(wú)甘油、抗抑性的預(yù)混液，專門(mén)為開(kāi)發(fā)從植物樣本中免核酸提取、進(jìn)行dna直擴(kuò)的常溫穩(wěn)定型檢測(cè)設(shè)計(jì)的一款qpcr試劑，適用于從植物裂解液中直接進(jìn)行dna擴(kuò)增和對(duì)低量污染物的高靈敏度識(shí)別，具有多重檢測(cè)中高度重現(xiàn)性的穩(wěn)健擴(kuò)增。
可風(fēng)干植物直擴(kuò)qpcr預(yù)混液是市面上shou款用于開(kāi)發(fā)常溫穩(wěn)定的植物dna直擴(kuò)的產(chǎn)品。它結(jié)合了抗抑性和可風(fēng)干的優(yōu)勢(shì)，為開(kāi)發(fā)高靈敏度，低成本的植物檢測(cè)提供了理想的解決方案。一小塊植物葉片在sds裂解液、堿性裂解液或水中加熱裂解后直接加入風(fēng)干的反應(yīng)預(yù)混液中即可進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)，獲得高靈敏度和可重復(fù)性的檢測(cè)結(jié)果。
可風(fēng)干植物qpcr預(yù)混液在干燥前后均能從使用不同裂解液的植物裂解樣本中進(jìn)行高效擴(kuò)增：
將一片番茄葉穿孔樣本分別加入 (a) 26 μl 0.1% sds裂解液 和 (b) 堿性裂解液 （20 μl 0.2m naoh +6 μl 2m tris-hcl, ph 7.5）在95 °c加熱5分鐘裂解。分別使用干燥前后的可風(fēng)干植物直擴(kuò)qpcr預(yù)混液對(duì)含有5% 和25% 的植物裂解液直接進(jìn)行擴(kuò)增，檢測(cè)番茄hsp21基因，對(duì)比預(yù)混液干燥前后的擴(kuò)增性能。
左圖：使用sds裂解液，棕色為濕液擴(kuò)增曲線，橙色為使用干燥預(yù)混液的擴(kuò)增曲線。
右圖：使用堿性裂解液，綠色為濕液擴(kuò)增曲線，橙色為使用干燥預(yù)混液的擴(kuò)增曲線。
結(jié)果表明，可風(fēng)干植物qpcr預(yù)混液在干燥前后均能從使用不同裂解液的植物裂解樣本中進(jìn)行高效擴(kuò)增。
對(duì)低量污染物的高靈敏度識(shí)別：
在可風(fēng)干植物直擴(kuò)qpcr預(yù)混液中加入水稻atpe引物和探針，然后將混合物進(jìn)行風(fēng)干。分別向40%的番茄葉堿性裂解液中加入1000拷貝(棕色)、100拷貝(橙色)、10拷貝(綠色)和1拷貝(藍(lán)色)的水稻基因組dna，然后用該樣本復(fù)溶風(fēng)干的反應(yīng)混合物，直接進(jìn)行qpcr擴(kuò)增。結(jié)果顯示，可風(fēng)干植物直擴(kuò)qpcr預(yù)混液zui低可以檢測(cè)到番茄裂解液樣本中1個(gè)拷貝的水稻atpe ，并且達(dá)到100%的擴(kuò)增。
重檢測(cè)中高度重現(xiàn)性的穩(wěn)健擴(kuò)增：
將水稻atpe基因(每反應(yīng)100個(gè)拷貝)和qpcr提取內(nèi)控dna(mdx027)添加到25%的番茄葉堿性裂解液中，然后用來(lái)復(fù)溶干燥的可風(fēng)干植物直擴(kuò)qpcr預(yù)混液，對(duì)番茄hsp21基因(棕色)、水稻atpe(綠色)和qpcr提取內(nèi)控dna(橙色)直接進(jìn)行擴(kuò)增，每個(gè)樣本均有12個(gè)重復(fù)。結(jié)果顯示了可風(fēng)干植物直擴(kuò)qpcr預(yù)混液在多重反應(yīng)中的高度重現(xiàn)性。
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