牛免疫球蛋白a(iga)elisa試劑盒用于測(cè)定血清,血漿及相關(guān)液體樣本中牛免疫球蛋白a(iga)含量。
實(shí)驗(yàn)原理
是采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(elisa),往預(yù)先包被牛免疫球蛋白a(iga)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、hrp標(biāo)記的檢測(cè)抗體,經(jīng)過(guò)溫育并*洗滌,用底物tmb顯色,tmb在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的,顏色的深淺和樣品中的牛免疫球蛋白a(iga)呈正相關(guān),用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(od值),計(jì)算樣品免疫球蛋白a(iga)的濃度。
牛免疫球蛋白a(iga)elisa試劑盒操作步驟:
1.取出試劑盒,室溫(20-25℃)放置30分鐘。
2.分組:取出96孔板,根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),把剩余的板條繼續(xù)冷藏處理,分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品組(6個(gè)濃度)、空白孔、待測(cè)樣品組。
注:為減少實(shí)驗(yàn)誤差,保證準(zhǔn)確性,建議設(shè)置復(fù)孔。
3.加樣:依照標(biāo)準(zhǔn)品的順序分別加入50ul的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中,空白對(duì)照孔加入50ul的蒸餾水,其余微孔中加入50ul的待測(cè)樣本。
4.加酶標(biāo)溶液:標(biāo)準(zhǔn)品組、待測(cè)樣本組各孔中加入100ul的酶標(biāo)溶液(空白對(duì)照孔除外)。
5.溫育:酶標(biāo)板用封板紙密封后,放入濕盒內(nèi)于37℃恒溫孵育1小時(shí)。
6.洗板:用稀釋后的洗滌液注滿每孔,靜置15-30s,充分清洗酶標(biāo)板5次,用吸水紙*拍干。
7.顯色:各孔加入顯色劑a液50ul后,再加入顯色劑b液50ul。
8.終止:25-37℃下避光反應(yīng)10-15分鐘,加入50ul終止液。
9.讀板:在450nm波長(zhǎng)讀取各孔的od值。
關(guān)鍵詞:酶標(biāo)儀