激光共聚焦熒光顯微鏡 活體熒光物質(zhì)檢查
激光共聚焦顯微鏡，簡稱clsm（confocal laser scanning microscopy），是一種利用激光共振效應(yīng)進(jìn)行成像的顯微鏡。它通過使用激光束掃描樣品的不同層面，將所得到的圖像合成成一幅清晰的三維圖像。與傳統(tǒng)顯微鏡相比，激光共聚焦顯微鏡具有更高的分辨率和更強(qiáng)的穿透能力，可以觀察到更加細(xì)微的結(jié)構(gòu)和更深層次的物質(zhì)。
在活體熒光物質(zhì)的檢查中，激光共聚焦顯微鏡發(fā)揮了重要的作用。通過標(biāo)記活體細(xì)胞或組織的特定結(jié)構(gòu)或分子，激光共聚焦顯微鏡可以實(shí)時(shí)觀察到這些結(jié)構(gòu)或分子的活動(dòng)和分布情況。
在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，它可以用于觀察細(xì)胞的生長、分裂和死亡過程，研究細(xì)胞信號傳導(dǎo)和分子交互作用等。在藥物研發(fā)中，它可以用于觀察藥物在活體細(xì)胞或組織中的分布情況，評估藥物的療效和毒性。此外，在神經(jīng)科學(xué)領(lǐng)域，激光共聚焦顯微鏡可以用于觀察神經(jīng)元的活動(dòng)和連接，揭示大腦的工作機(jī)制。
ncf950激光共聚焦顯微鏡較寬場熒光顯微鏡的優(yōu)點(diǎn)：
l能夠通過熒光標(biāo)本連續(xù)生產(chǎn)薄（0.5至1.5微米）的光學(xué)切片，厚度范圍可達(dá)50微米或更大。（主要優(yōu)點(diǎn)）
l控制景深的能力。
l能夠從樣品中分離和收集焦平面，從而消除熒光樣品通?？吹降慕雇狻办F霾”，非共焦熒光顯微鏡下無法檢測到。（最重要的特點(diǎn)）
l 從厚試樣收集連續(xù)光學(xué)切片的能力。
l通過三維物體收集一系列圖像，用于二維或三維重建。
l收集雙重和三重標(biāo)簽，精確的共定位。
l用于對在不透明的圖案化基底上生長的熒光標(biāo)記細(xì)胞之間的相互作用進(jìn)行成像。
l有能力補(bǔ)償自發(fā)熒光。
耐可視共聚焦成像效果圖 尼康共聚焦成成像效果圖
ncf950激光共聚焦顯微鏡應(yīng)用，共聚焦顯微鏡在以下研究領(lǐng)域中應(yīng)用較為廣泛：
1、細(xì)胞生物學(xué)：細(xì)胞結(jié)構(gòu)、細(xì)胞骨架、細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)、流動(dòng)性、受體、細(xì)胞器結(jié)構(gòu)和分布變化、細(xì)胞凋亡；
2、生物化學(xué)：酶、核酸、fish、受體分析
3、藥理學(xué)：藥物對細(xì)胞的作用及其動(dòng)力學(xué)；
4、生理學(xué)：膜受體、離子通道、離子含量、分布、動(dòng)態(tài)；
5、遺傳學(xué)和組胚學(xué)：細(xì)胞生長、分化、成熟變化、細(xì)胞的三維結(jié)構(gòu)、染色體分析、基因表達(dá)、基因診斷；
6、神經(jīng)生物學(xué)：神經(jīng)細(xì)胞結(jié)構(gòu)、神經(jīng)遞質(zhì)的成分、運(yùn)輸和傳遞；
7、微生物學(xué)和寄生蟲學(xué)：細(xì)菌、寄生蟲形態(tài)結(jié)構(gòu)；
8、病理學(xué)及病理學(xué)臨床應(yīng)用：活檢標(biāo)本的快速診斷、腫瘤診斷、自身免疫性疾病的診斷；
9、生物學(xué)、免疫學(xué)、環(huán)境醫(yī)學(xué)和營養(yǎng)學(xué)。
ncf950激光共聚焦顯微鏡配置
ncf950激光共聚焦配置表
激光器
激光405 nm、488 nm、561 nm、640 nm
探測器
波長：400-750nm，探測器：3個(gè)獨(dú)立的熒光檢測通道；1個(gè)dic透射光檢測通道
掃描頭
最大像素大?。?096 x 4096 掃描速度：2 fps（512 x 512像素，雙向），18 fps（512 x 32像素，雙向），圖像旋轉(zhuǎn): 360°
掃描模式
x-t, y-t, x-y, x-y-z, x-y-z-t
針孔
無級變速六邊形電動(dòng)針孔；調(diào)節(jié)范圍：0-1.5毫米
共焦視場
φ18mm內(nèi)接正方形
圖像位深
12bits
配套顯微鏡
nib950全電動(dòng)倒置顯微鏡
光學(xué)系統(tǒng)
nis60無限遠(yuǎn)光學(xué)系統(tǒng)（f200)
目鏡(視野)
10×(25)，ep17.5mm，視度可調(diào)-5～+5，接口φ30
觀察鏡筒
鉸鏈?zhǔn)饺坑^察鏡筒，45度傾斜，瞳距47-78mm，目鏡接口φ30，固定視度；1）目/攝切換：（100/0,50/50,0/100)；2）目視/關(guān)閉目視/可調(diào)焦勃氏鏡
nis60物鏡
10×復(fù)消色差物鏡，na=0.45 wd=4.0 蓋玻片=0.17
20×復(fù)消色差物鏡，na=0.75 wd=1.1 蓋玻片=0.17
60×半復(fù)消色差物鏡，na=1.40 wd=0.14 蓋玻片=0.17 油鏡
100×復(fù)消色差物鏡，na=1.45 wd=0.13 蓋玻片=0.17 油鏡
物鏡轉(zhuǎn)換器
電動(dòng)六孔轉(zhuǎn)換器（擴(kuò)展插槽），m25×0.75
聚光鏡
6孔位電動(dòng)控制：na0.55，wd26；相襯(10/20,40,60選配）
dic（10x，20x/40x）選配.空孔
照明系統(tǒng)
透射柯拉照明，10w led照明；
落射照明：寬場光纖照明
6孔位電動(dòng)熒光轉(zhuǎn)盤（b，g，u標(biāo)配）；電動(dòng)熒光光閘；
中間倍率切換
手動(dòng)1x，1.5x、共焦切換
機(jī)身端口
分光比：
左側(cè):目視=100：0；右側(cè):目視=100：0；
平臺
電動(dòng)控制：行程范圍130 mm x100 mm （臺面325 mm x 144 mm ）最大速度：25mm/s；分辨率：0.1μm - 重復(fù)精度：3μm。機(jī)械可調(diào)樣品夾板
調(diào)焦系統(tǒng)
同軸粗微動(dòng)升降機(jī)構(gòu)，行程：焦點(diǎn)上7下2；粗調(diào)2mm/圈，微調(diào)0.002mm/圈；可手動(dòng)和電動(dòng)控制，電動(dòng)控制時(shí)，最小步進(jìn)0.01um；
dic插板
10x，20x，40x插板；可放置于轉(zhuǎn)換器插槽；選配
控制
搖桿，控制盒，usb連接線
軟件
軟件：nomis advanced c
圖像顯示/圖像處理/分析
2d/3d/4d圖像分析，經(jīng)時(shí)變化分析，三維圖像獲得及正交顯示，圖像拼接，多通道彩色共聚焦圖像