王龍1，張霄凌2，何冬云1，楊義榮2，王生榮1※，王致和2，陳乓1
（1甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)草業(yè)學(xué)院，蘭州730070；2甘肅省農(nóng)墾農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，蘭州733006）
摘要：2006年對萬壽菊葉斑病在甘肅主要栽培區(qū)的武威黃羊鎮(zhèn)、古浪、景泰等地發(fā)生情況的調(diào)查結(jié)果表明，發(fā)病率在33% - 85%，病情指數(shù)在5.7 - 48.0。通過室內(nèi)分離鑒定，確定引起當(dāng)?shù)厝f壽菊葉斑病的病原為真菌類的鏈格孢alternaria sp．。
關(guān)鍵詞：萬壽菊；葉斑?。徊『φ{(diào)查；病原鑒定；鏈格孢
萬壽菊（tagetes erectal）作為觀賞植物和藥用植物在世界上有廣泛分布，是園林中常見的草本花卉。作為藥用植物，其花和根可入藥，有清熱解毒、化痰止咳、解毒消腫之功能l1.21。近年來，其鮮花又成為提取天然食用色素的一種工業(yè)原料，市場應(yīng)用前景廣闊，國際需求量不斷增加。但是隨著種植面積的擴(kuò)大，病蟲害的嚴(yán)重發(fā)生成為其發(fā)展的一個限制因素，特別是萬壽菊葉斑病的發(fā)生，可導(dǎo)致萬壽菊葉片早枯，花蕾凋萎。其發(fā)病率一般在20% - 30%，嚴(yán)重時可達(dá)95%以l，尤其7月中旬以后顯著加重，而且蔓延迅速，短時間內(nèi)即可蔓延至全田，普遍發(fā)牛，造成嚴(yán)重?fù)p失。為了搞清引起葉斑病的病原，以期為生產(chǎn)上有效地控制該病提供依據(jù)。
l材料與方法
1.1萬壽菊葉斑病田間調(diào)查
2005年9月至2006年9月，先后對甘肅省武威市黃羊鎮(zhèn)、古浪縣和白銀市景泰縣萬壽菊栽培基地萬壽菊葉斑病的發(fā)生情況（病害的發(fā)生、為害程度、產(chǎn)量損失估計(jì)）進(jìn)行了專項(xiàng)調(diào)查。調(diào)查采用5點(diǎn)取樣法，每樣點(diǎn)取樣20株。對栽培區(qū)不同發(fā)病類型進(jìn)行調(diào)查、采樣，采集不同階段不同發(fā)病部位及不同癥狀表現(xiàn)的植株，將標(biāo)本用吸水紙壓干，填寫好標(biāo)本登記卡，以備室內(nèi)鑒定。
調(diào)查分級標(biāo)準(zhǔn)如下：0級——植株無癥狀；1級一植株下部葉片有零星病斑，發(fā)病葉片少于1%；2級——植株中部、下部葉片發(fā)病，發(fā)病葉片在1% - 5%之間；3級一植株葉片發(fā)病在5% - 20%之間，病斑有愈合發(fā)生；4級——植株發(fā)病嚴(yán)重，葉片枯死，花及花萼受到侵染枯死變黑。
1.2萬壽菊葉斑病的癥狀描述
在室內(nèi)首先對標(biāo)本進(jìn)行癥狀描述：病斑著生部位、形狀、顏色、大小及其它特征等。
1.3病原菌的分離與純化
在室內(nèi)對植株不同發(fā)病部位（葉、莖、花）進(jìn)行常規(guī)分離，即切取小塊病組織，用75%的酒精擦拭組織表面后用0.1%的升汞水溶液表面消毒1 min，然后用無菌水沖洗3次，將病組織移植于pda平板培養(yǎng)基上，在25℃下培養(yǎng)，待長出菌落后將分離物進(jìn)行編號；利用2%瓊脂培養(yǎng)基進(jìn)行稀釋純化，將配好的孢子液滴移到瓊脂平板培養(yǎng)基，鏡檢只有單個孢子的部位，做好標(biāo)記再移植，從而得到純培養(yǎng)菌株。
1.4致病性測定
將獲得的各菌株用pda培養(yǎng)基培養(yǎng)于25℃溫箱中培養(yǎng)5-7天，配成濃度為105 - 106個孢子／ml的孢子懸浮液，分別采用普通噴霧法、高壓噴霧法及摩擦接種法對健康萬壽菊植株進(jìn)行接種[3-5]。接種后置于25℃溫室內(nèi)，連續(xù)觀察并記錄發(fā)病情況、發(fā)病癥狀，之后再分離。
1.5病原菌形態(tài)特征
對有致病性的菌株，依據(jù)真菌學(xué)常規(guī)方法，在pca平板培養(yǎng)基卜培養(yǎng)5-7天，觀察并記錄各菌株的菌落形狀、色澤；用顯微鏡鏡檢測定分牛孢子梗的大小、著生部位、形態(tài)，記載分生孢子縱橫隔膜的數(shù)目、顏色，喙的有無、長短及形態(tài)。按照分類系統(tǒng)確定病原菌的種類。對有些不產(chǎn)孢子的種類，采用不同的營養(yǎng)要求和培養(yǎng)條件來誘發(fā)和刺激產(chǎn)孢，根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)鑒定病原種類。
2結(jié)果與分析
2.1田間調(diào)查結(jié)果
從調(diào)查結(jié)果（表1）可以看出，萬壽菊葉斑病在甘肅省黃羊河農(nóng)場、古浪縣和景泰縣萬壽菊栽培基地普遍發(fā)生，發(fā)病率—般在23% - 95%。但發(fā)病的嚴(yán)重程度各地差異較大，病情指數(shù)低的只有5.75，病情指數(shù)最高的地塊可達(dá)48.5;從各地的發(fā)病情況來看，白銀市景泰縣病害發(fā)生較為嚴(yán)重，武威市黃羊河農(nóng)場次之，古浪縣發(fā)病相對較輕；從不同前茬作物與發(fā)病的關(guān)系看，前茬為胡麻發(fā)病嚴(yán)重，荒地或貧瘠土地發(fā)病也較重，前茬種植大麥、小麥和玉米發(fā)病次之，前茬為百號(種藥用植物)發(fā)病較輕。
2.2萬壽菊葉斑病的癥狀
萬壽菊葉斑病在甘肅省萬壽菊栽培區(qū)從幼苗期到成株期均可發(fā)牛，病菌主要為害葉、莖、花。
(1)苗期發(fā)病，葉片正面產(chǎn)生針尖大小褐色或紅褐色圓形、近圓形病斑，病斑中央灰白色或黃白色，邊緣黑褐色，葉片背面的病斑邊緣不規(guī)則。溫濕度適宜時，病葉上密布褐色小點(diǎn)，并可愈合成片，嚴(yán)重時造成葉片枯死，導(dǎo)致死茁。
(2)成株期葉片發(fā)病，自下部葉片逐漸向上部蔓延，從葉片緣處或從葉片巾部開始發(fā)生。初期病斑如針尖大小，褐色，圓形或橢圓形，少數(shù)不規(guī)則形，巾央灰白或黃白色，邊緣黑褐色壞死，葉背面的病斑呈黃褐色。病斑一般直徑大小為0.5 mm，最大直徑可達(dá)7.0 mm。以后病斑逐漸擴(kuò)大形成橢圓形或不規(guī)則形的紫褐色病斑。發(fā)病嚴(yán)重時，病斑連片，造成葉片枯死。
(3)莖部染病，多從葉腋處先發(fā)生，并向新生枝及主莖擴(kuò)展，造成病部變褐變紫，病斑多為圓形或長橢圓形。嚴(yán)重時，病斑可以布滿莖表，使莖的表皮呈紫褐色，造成植株生長衰弱。摘花后常從摘口處向下變黑干枯。
(4)花部受害，多從花萼開始，初為褐色小點(diǎn)，中央灰白色，邊緣有紫褐色壞死線，以后逐漸擴(kuò)展，并引起花瓣染病，引起花瓣凋萎，嚴(yán)重時整朵花密布病斑，花瓣變褐枯死，苞片變黑，嚴(yán)重影響產(chǎn)量和品質(zhì)。
2.3病原菌分離
采用組織分離法，在pda培養(yǎng)基上先后分離200個病塊組織，分離到160個菌落。根據(jù)菌落形態(tài)將其歸為3類，其中鏈格孢屬(altemaria sp.)為149株，占74.5%，灰霉菌(botrytis sp.)為4株，占2%，其他7株，占3.50/。
在鏈格孢中，根據(jù)菌落顏色分為h1和h2兩類。
2.4致病性測定
對鏈格孢的2種菌株采用摩擦和噴霧接種方法均可使植株發(fā)?。ū?），發(fā)病癥狀與田間一致，從接種的健康萬壽菊植株上均可熏新分離獲得同一病原菌，說明病菌可以從傷u或自然孔口直接侵入，但有傷口比無傷口發(fā)病速度更快，且致病率高。
2_5病原菌的形態(tài)特征
對分離到的致病菌，在pda和pca平板培養(yǎng)基卜培養(yǎng)，1周后的菌落形態(tài)是：菌落墨綠色或橄欖色，后期黑褐色，氣生菌絲豐富，棉絮狀，分生孢子梗單生或簇生，直或向一側(cè)彎曲，淺褐色，有分隔。分生孢子的大小為(18.3 - 25.4)×(8.8 -12.0)um，平均為21.6×10.6 um;倒棍棒形、長卵圓形、梭形等；初色淺，后呈黃褐色、深褐色；有2～4個橫隔，0-3個縱隔，分隔處有縊縮；喙較短，柱狀，大小為(2.74 - 4.5)×(2.4 - 4.16)“m．無分隔。
分離到的2個菌株，盡管菌落顏色有一些差異，但在主要形態(tài)特征方面沒有顯著差異，認(rèn)為屬于同一種，確定為鏈格孢(alternaria sp．)。
該菌與萬壽菊鏈格孢(alternaria tagetica)的形態(tài)明顯不同，與侵染菊科植物的鏈格孢(altemaria sonchi)類似，但有關(guān)其它鏈格孢為害萬壽菊的報道還未見諸于文獻(xiàn)。有關(guān)種類有待于進(jìn)一步深入斫究。
3小結(jié)
通過本次調(diào)查和病原菌鑒定，初步確定引起萬壽菊葉枯病的病原是真菌鏈格孢(alternaria sp.)。進(jìn)一步摸清了甘肅省武威黃羊河農(nóng)場、古浪、白銀地區(qū)景泰縣萬壽菊葉斑病的病害發(fā)生、分布、為害情況。調(diào)查結(jié)果表明，該病在上述地區(qū)普遍發(fā)生，發(fā)病率一般在50% - 80u/0，輕者也有20%，嚴(yán)重地塊達(dá)到95%。發(fā)病率高，但早期沒有引起重視的原因是：萬壽菊栽培密度較大，早期不易被發(fā)現(xiàn)。在調(diào)查時發(fā)現(xiàn)，所有底部葉片幾乎都有葉斑發(fā)生，說明葉斑病在早期就發(fā)病普遍，只是在生長后期才為害植株上部，導(dǎo)致花器、心葉枯死。所以應(yīng)注意及早觀察底部葉片的發(fā)病情況，以便及時有效地實(shí)施防治。