主要用途 乳酸脫氫酶（ldh）釋放法細胞繁殖與毒性定量檢測試劑是一種旨在通過酶聯(lián)連續(xù)反應系統(tǒng)檢測由于細胞損 傷導致的細胞內穩(wěn)定的乳酸脫氫酶釋放到細胞外，使四唑鹽染料碘硝基氯化四氮唑（int）還原為紅色甲臜 （farmazan），即比色法定量測定酶活性，以評價活體細胞繁殖的而經典的技術方法。該技術經過精心 研制、成功實驗證明的。適用于各種藥物、化學、環(huán)境因子和營養(yǎng)因子處理的貼壁或懸浮生長中的動物或人 體細胞。替代傳統(tǒng)的同位素[51 cr]釋放檢測的。產品嚴格無菌，即到即用，簡捷敏感，性能穩(wěn)定， 顯色清晰，檢測準確，重復性好。
技術背景 細胞凋亡或壞死而造成的細胞膜結構的損害或*裂解導致細胞漿內的酶釋放外泄到培養(yǎng)液里，其中包括活 性穩(wěn)定的乳酸脫氫酶。乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase；ldh）釋放法的測定是基于在乳酸脫氫酶的作用 下，還原nad+反應生成的nadh，再與氧化型2-（4-碘苯）-3-（4-硝基苯）-5-苯四唑（iodonitrotetrazolium； int）在硫辛酰胺脫氫酶（diaphorase）的催化下反應生成紅色生色產物甲臜（formazan），在490nm波長下產 生吸收峰，從而確定釋放的乳酸脫氫酶的活性，作為細胞膜完整性的標志：吸光值與細胞死亡或毒性程度成 線性正相關。酶聯(lián)連續(xù)反應系統(tǒng)為：
懸浮細胞檢測 1． 準備 96 孔細胞培養(yǎng)板的待測懸浮細胞（每孔 100 微升）：包括未處理的對照細胞（樣品對照孔），未處 理的后續(xù)裂解的細胞（樣品最大酶活性對照孔），以及藥物處理的細胞（處理樣品孔），并做好標記（細 胞密度為每孔 5 x 103 至 5 x 104細胞）
2． 到規(guī)定的檢測時間點前 1 小時，從濕潤的細胞培養(yǎng)箱里取出待測的 96 孔細胞培養(yǎng)板（注意：確保細胞培 養(yǎng)液維持在 100 微升容量）
3． 加入 xx 微升裂解液（reagent a）到未處理的后續(xù)裂解的細胞孔里（樣品最大酶活性對照孔）
4． 同時加入 xx 微升補充液（reagent b）到其余所有檢測孔里
5． 放回濕潤的細胞培養(yǎng)箱里，繼續(xù)培養(yǎng) 1 小時，即規(guī)定檢測時間
6． 從濕潤的細胞培養(yǎng)箱里取出待測的 96 孔細胞培養(yǎng)板
7． 放進孔板離心機離心 10 分鐘，速度為 250g
8． 分別小心移取 50 微升上清液到新的 96 孔板的相應孔里，避免觸摸細胞顆粒，同時注意做好標記
9． 分別加入 xx 微升反應液（reagent c）（注意：使用前，須混勻） 210．分別加入 xx 微升顯色液（reagent d）
11．搖動 96 孔板混勻
12．在 30℃溫度下孵育 30 分鐘，避免光照
13．（選擇步驟）分別加入 xx 微升終止液（reagent e）
14．即刻放進酶標儀里測讀：波長 490nm
15．計算處理樣品實際吸光讀數：處理樣品孔吸光讀數－樣品對照孔吸光讀數
16．計算樣品細胞最大酶活性的實際吸光讀數：樣品最大酶活性對照孔吸光讀數－樣品對照孔吸光讀數）
17．計算細胞毒性或死亡率（％）： （處理樣品實際吸光讀數÷樣品細胞最大酶活性的實際吸光讀數）x 100
18．或繪制細胞生長曲線：縱座標（y 軸）為實際吸光讀數（a）；橫坐標（x 軸）為細胞數或時間點或藥物 濃度；據此計算其 ld50
關鍵詞：細胞培養(yǎng)箱 培養(yǎng)箱 離心機 酶標儀