sf9(昆蟲卵巢細(xì)胞)細(xì)胞培養(yǎng)教程
常 見 問 題 及 解 決 方 案
q1. 細(xì)胞密度怎么計算的？
嚴(yán)格意義上，細(xì)胞密度需要收集細(xì)胞懸液計數(shù)細(xì)胞數(shù)量，但在實際培養(yǎng)過程中，并不需要為了精確控制細(xì)胞數(shù)量而消化細(xì)胞計數(shù)。因此，常用的細(xì)胞密度指細(xì)胞相對于最大生長密度的比值，貼壁細(xì)胞可以粗略的用細(xì)胞所占培養(yǎng)容器底面積百分比表示，即顯微鏡下觀察培養(yǎng)容器底部，有細(xì)胞的區(qū)域占總區(qū)域的百分比值，當(dāng)然這種表達(dá)方式受限于單個細(xì)胞生長不同密度時所占面積不同導(dǎo)致并不嚴(yán)謹(jǐn)，但也是相當(dāng)直觀、簡便的表現(xiàn)細(xì)胞狀態(tài)的一種方式；
q2. 培養(yǎng)過程中細(xì)胞碎片較多怎么處理？
1.細(xì)胞內(nèi)的黑色顆粒是細(xì)胞外分泌泡及細(xì)胞器折光，這個屬于細(xì)胞自身特性，無法清除也無法改變，大部分細(xì)胞都會有這種現(xiàn)象，只是不同細(xì)胞顆粒多少有區(qū)別，細(xì)胞培養(yǎng)體系不適應(yīng)、營養(yǎng)缺乏、滲透壓異常等均可能導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)顆粒增加，建議使用合適的培養(yǎng)條件。
2. 細(xì)胞外的黑色顆粒大部分是細(xì)胞碎片和細(xì)胞代謝產(chǎn)物，可以先吸走培養(yǎng)基后用pbs潤洗清除，再加新的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。潤洗不能清除的可以換液清洗后等細(xì)胞密度70-80%左右消化處理細(xì)胞，消化完成后加培養(yǎng)基終止消化，混勻細(xì)胞，收集細(xì)胞懸液900-1000rpm(約150g)離心3min，棄上清。再加5ml pbs重懸細(xì)胞，再離心后，用培養(yǎng)基重懸接種到新的培養(yǎng)皿。第二次pbs重懸是為了去除碎片，如果平時碎片比較少，傳代時可以省略pbs重懸的步驟；如果碎片很多，建議pbs多洗幾次。
q3. 懸浮培養(yǎng)需要怎么操作？
本公司sf9細(xì)胞自適應(yīng)懸浮培養(yǎng)，基本無需訓(xùn)化。 需要懸浮培養(yǎng)前需保證細(xì)胞活性90%以上，收集細(xì)胞懸液，以1x107細(xì)胞/ml的密度接種至搖瓶中培養(yǎng)即可。搖瓶培養(yǎng)轉(zhuǎn)速跟實際條件相關(guān)，尚恩使用轉(zhuǎn)速約100rpm/min，客戶可以根據(jù)自身實驗室情況選擇合適的轉(zhuǎn)速（通常80-150rpm之間）。
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