棉花內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)sad1基因染料法pcr試劑盒檢測(cè)常見(jiàn)問(wèn)題的常見(jiàn)原因：
1. cdna產(chǎn)量的很低可能的原因：
1) rna模板質(zhì)量低
2) 對(duì)mrna濃度估計(jì)過(guò)高
3)反應(yīng)體系中存在反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑或反轉(zhuǎn)錄酶量不足
4)同位素磷32過(guò)期
5)反應(yīng)體積過(guò)大，不應(yīng)超過(guò)50μl
2. 擴(kuò)增產(chǎn)物在電泳分析時(shí)沒(méi)有條帶或條帶很淺
1)最常見(jiàn)的原因在于您的反應(yīng)體系是pcr的反應(yīng)體系而不是rt-pcr的反應(yīng)體系
3) 與反應(yīng)起始時(shí)rna的總量及純度有關(guān)
4) 建議在試驗(yàn)中加入對(duì)照rna
5) 第一鏈的反應(yīng)產(chǎn)物在進(jìn)行pcr擴(kuò)增時(shí)，在總的反應(yīng)體系中的含量不要超過(guò)1/10
6) 建議用oligo(dt)或隨機(jī)引物代替基因特異性引物（gsp）用于第一鏈合成。由于rna模板存在二級(jí)結(jié)構(gòu)，如環(huán)狀結(jié)果，有可能導(dǎo)致gsp無(wú)法與模板退火；或ssⅱ反轉(zhuǎn)錄酶無(wú)法從此引物進(jìn)行有效延伸。
7) 目的mrna中含有強(qiáng)的轉(zhuǎn)錄中止位點(diǎn)，可以試用以下方法解決：
a. 將第一鏈的反應(yīng)溫度提高至50℃。
b. 使用隨機(jī)六聚體代替oligo(dt)進(jìn)行第一鏈反應(yīng)。
3. 產(chǎn)生非特異性條帶
1)用rt陰性對(duì)照檢測(cè)是否被基因組dna污染。如果rt陰性對(duì)照的pcr結(jié)果也顯示同樣條帶，則需要用dnase i重新處理樣品。
2)在pcr反應(yīng)中，非特異的起始擴(kuò)增將導(dǎo)致產(chǎn)生非特異性結(jié)果。在低于引物tm 2至5℃的溫度下進(jìn)行退火，降低鎂離子或是目的dna的量將減少非特異性結(jié)果的產(chǎn)生。
3)由于mrna剪切方式的不同，根據(jù)選擇引物的不同將導(dǎo)致產(chǎn)生不同的rt-pcr結(jié)果。
4. 產(chǎn)生彌散（smear）條帶
1)在pcr反應(yīng)體系中第一鏈產(chǎn)物的含量過(guò)高
2)減少引物的用量
3)優(yōu)化pcr反應(yīng)條件/減少pcr的循環(huán)次數(shù)
4)在用dnase處理被dna污染的rna樣品時(shí)，其產(chǎn)生的寡核苷酸片段會(huì)產(chǎn)生非特異性擴(kuò)增，一般會(huì)顯示為彌散背景。
5. 產(chǎn)生大分子量的彌散條帶
1)大多數(shù)情況下是由于退火溫度過(guò)低而導(dǎo)致的非特異性的起始及延伸產(chǎn)生的
2)對(duì)于長(zhǎng)片段的pcr，建議將反應(yīng)體系中cdna的濃度稀釋至1:10（或1:100-1:200）
6. 在無(wú)反轉(zhuǎn)錄酶的情況下，對(duì)照rna獲得擴(kuò)增結(jié)果詳細(xì)解析關(guān)于elisa試劑盒的儲(chǔ)存于有效期多久
對(duì)于我們購(gòu)買(mǎi)回來(lái)的elisa試劑盒儲(chǔ)存及有效期，相信大家都是根據(jù)盒子上的日期決定它的有效期的，但是如果我們實(shí)驗(yàn)開(kāi)封過(guò)的試劑盒，怎么確定它有多久的有效期呢？這點(diǎn)可能很多人不知道該如何保存。不用擔(dān)心，我司為您詳細(xì)解析關(guān)于。