材料與儀器
te 或去離子水 pcr 產(chǎn)物離心機(jī)和轉(zhuǎn)子 pcr 濾 件 微量離心管
步驟
一、材料1. 緩沖液和溶液te(lommol/l tris-hcl，lmmol/l edta，ph7.5) 或去離子水2. 核酸和寡核苷酸待測序的 pcr 產(chǎn)物3. 離心機(jī)和轉(zhuǎn)子帶有固定傾角轉(zhuǎn)子的小型離心機(jī)，如 eppemlorf5415c4. 特殊設(shè)備amiconmicrocon-pcr 濾件（millipore) 或者相當(dāng)?shù)漠a(chǎn)品，微董離心管或接收管二、方法1. 對每一個待純化的 pcr 產(chǎn)物，都在接收管中放置一個濾件，濾件的儲液面向上儲液池中加入 400ul 去離子水或 te，注意加樣時不要觸及膜。加入 100ulpcr 產(chǎn)物，避免帶進(jìn)礦物油。如果 pcr 產(chǎn)物不足 100ul, 用去離子水或 te 補(bǔ)足，蓋上蓋子。2. 將 1 中所得組合體用帶有固定傾角轉(zhuǎn)子的離心機(jī)，l000 g 離心 15 min(例如，eppendorf5415c 離心機(jī)上 3300r/min)。注意蓋子和管的結(jié)合部朝向轉(zhuǎn)子的中央。3. 移去濾件，將其放入一干凈的收集管中，有膜面朝上（如果愿意，濾件可以一直存到樣品分析結(jié)束）。在濾件上小心地加 20ul 去離子水或 te，注意不要觸及膜，然后將濾件反轉(zhuǎn)過來，放回到干凈的收集管中，使帶有液體的一面朝下。4.1000 g 離心 2 min, 收集純化的片段。
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