利用血管緊張素i的提取比較傳統(tǒng)spe柱與磁性萃取劑的性能
關(guān)鍵詞
血管緊張素i，液相色譜質(zhì)譜，固相萃取，angiotensin i，ang i，renin，lc-ms/ms，spe
前言
血管緊張素i（ang i）是較為常見的臨檢標(biāo)志物之一，通過對血管緊張素i提取效果的測試，能夠有效地評價各種樣品前處理手段的臨床適用性和技術(shù)性能。
本文通過對比市售的某進(jìn)口品牌hlb 96位spe多孔板和hlb磁性spe萃取劑提取ang i試驗的各項方法學(xué)指標(biāo)，直觀地比較了兩者的性能表現(xiàn)。也為臨床spe樣品前處理技術(shù)的發(fā)展前景提供了非常有價值的參考。
實驗設(shè)計
如上表所示，使用1% bsa制備四個濃度水平的ang i系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，輔以穩(wěn)定同位素標(biāo)記的ang i內(nèi)標(biāo)。
設(shè)定如下條件的spe，應(yīng)用于某進(jìn)口品牌hlb 96位spe多孔板。使用適配的正壓96孔spe操作裝置運行樣品。
步驟
名稱
操作
1
活化
使用500 μl甲醇活化spe板兩次
2
平衡
使用500 μl5%甲酸水溶液活化spe板兩次
3
上樣
取500 μl loq、低（l）、中（m）、高（h）上樣
4
淋洗1
使用500 μl5%甲酸水溶液淋洗spe板兩次
5
淋洗2
使用500 μl20%甲醇水溶液淋洗spe板兩次
6
洗脫
每孔各加入250 μl甲醇，收集洗脫液于96孔板中
與此對應(yīng)的，為auto m32全自動萃取儀設(shè)定如下的程序運行樣品，每個樣品使用2mg hlb磁性萃取劑。
指令
溶液
孔位
溶劑量（μl）
活化
甲醇
1
500
平衡
5%甲酸水溶液
2
500
上樣
樣品溶液
3
500
淋洗1
5%甲酸水溶液
4
500
淋洗2
20%甲醇水溶液
5
500
洗脫
甲醇
6
250
排廢
/
2
600
某進(jìn)口品牌hlb96位spe多孔板
auto m32全自動萃取儀
數(shù)據(jù)和比較
將實驗設(shè)計中所述的四個標(biāo)準(zhǔn)樣本，每個樣品重復(fù)三次提取，比較兩種前處理方法提取后，在lc-ms/ms上測得的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，結(jié)果如下圖所示。其中，左側(cè)藍(lán)色柱為使用某進(jìn)口品牌hlb 96位spe多孔板提取后的測定結(jié)果，右側(cè)橙色柱為使用磁性萃取劑提取后的測定結(jié)果。
可以看到，兩種前處理方法無論在外表峰面積、內(nèi)標(biāo)峰面積、計算濃度上的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差均沒有顯著的差別，但是磁性萃取劑的結(jié)果在大多數(shù)水平下都略好于傳統(tǒng)的96位spe多孔板。
在提取率的比較中，我們選擇某進(jìn)口品牌hlb 96位spe多孔板提取后測得的峰面積為基準(zhǔn)（99%），以磁性萃取劑提取后測得的峰面積與之比較。如下圖所示，左側(cè)藍(lán)色柱為使用某進(jìn)口品牌hlb 96位spe多孔板提取后的測定結(jié)果，右側(cè)橙色柱為使用磁性萃取劑提取后的測定結(jié)果。
可以看到，在所有濃度水平下，磁性萃取劑提取測得峰面積均顯著地好于傳統(tǒng)的96位spe多孔板，且均超過后者50%以上，甚至達(dá)到了約1.8倍。
最后如下圖展示的loq水平兩種方法提取后，在lc-ms/ms所得的mrm色譜圖。圖a為使用傳統(tǒng)的96位spe多孔板所得色譜圖，圖b為磁性萃取劑所得色譜圖。
明顯地，在loq水平下，磁性萃取劑提取得到的色譜峰高超過了傳統(tǒng)的96位spe多孔板提取，這與提取率結(jié)果是一致的。
結(jié)果討論
通過上述數(shù)據(jù)比較，我們可以得到如下表所述的結(jié)果。
可以看到，在以上評價范圍內(nèi)，磁性萃取劑的提取效果均優(yōu)于某進(jìn)口品牌的hlb 96位spe多孔板。同時，auto m32全自動提取儀固有的“一次移液”和“無人值守”操作模式，降低了樣品前處理中的人為參與，同時大幅提高了自動化水平。