盤點(diǎn)核酸法檢測(cè)支原體的具體方法

發(fā)布時(shí)間:2024-04-09
核酸法檢測(cè)支原體的有點(diǎn)顯而易見:便捷、高效、準(zhǔn)確率高、靈敏度高。核酸法分為普通pcr法和qpcr法。這兩種方法各有優(yōu)缺點(diǎn),也各有適應(yīng)場(chǎng)景。
常規(guī)法pcr檢測(cè)試劑盒——venor®gem classic
該試劑盒可以通過常規(guī) pcr 對(duì)研究和工業(yè)中的細(xì)胞培養(yǎng)上清液、培養(yǎng)基和生物制藥中的支原體污染進(jìn)行快速、可靠和省時(shí)的常規(guī)監(jiān)測(cè)。
細(xì)胞培養(yǎng)物和培養(yǎng)基成分中的支原體(柔膜菌綱:支原體、無膽原體、螺旋體)物種都是通過高度保守的 rrna 操縱子擴(kuò)增來特異性檢測(cè)的,或者更具體地說,通過擴(kuò)增支原體基因組中的 16s rrna 編碼區(qū)來特異性檢測(cè)。在265-278 bp處檢測(cè)到支原體特異性擴(kuò)增。通過使用提供的內(nèi)擴(kuò)增對(duì)照(在191 bp處檢測(cè)到),可以排除由于pcr抑制劑或dna提取不當(dāng)引起的假陰性結(jié)果。
優(yōu)點(diǎn):便捷成本低
缺點(diǎn):無法定量
qpcr檢測(cè)試劑盒——venor®gem qep
支原體熒光定量pcr法(qpcr):是在常規(guī)pcr基礎(chǔ)上,將『針對(duì)支原體特異性保守序列的探針』做熒光標(biāo)記,使pcr擴(kuò)增后的產(chǎn)物帶有熒光,利用熒光信號(hào)的變化和配套軟件,進(jìn)行dna擴(kuò)增反應(yīng)的實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè),簡(jiǎn)稱qpcr。
優(yōu)點(diǎn):靈敏度高、特異性強(qiáng)、時(shí)間短,2-3小時(shí)出結(jié)果,檢測(cè)結(jié)果可定量,操作簡(jiǎn)便
缺點(diǎn):
對(duì)于已做支原體滅活處理的樣品,由于支原體dna仍舊存在其中,pcr結(jié)果會(huì)出現(xiàn)假陽性。(可用培養(yǎng)法做補(bǔ)充驗(yàn)證)
不同廠家生產(chǎn)的試劑盒質(zhì)量差異巨大(由于引物及內(nèi)在設(shè)計(jì)不同),需謹(jǐn)慎選擇,盡量在專業(yè)人員推薦指導(dǎo)下使用。
『支原體qpcr檢測(cè)試劑盒』介紹
德國(guó)mb公司生產(chǎn)的支原體qpcr檢測(cè)試劑盒(均為探針法檢測(cè)),依據(jù)操作步驟的細(xì)微差別, 分『經(jīng)典法』和『一步法』兩種。
此兩類試劑盒較全球其他廠家同類產(chǎn)品,具有以下優(yōu)點(diǎn):
①經(jīng)典法qpcr試劑盒遵循歐洲藥典流程要求
②高特異性,一次檢測(cè)即可涵蓋了所有可能感染細(xì)胞的支原體物種(涵蓋歐洲藥典規(guī)定的9種支原體),根據(jù)序列一致性,至少可以檢測(cè)到107種支原體物種。操作簡(jiǎn)單,易于觀察(使用mb的試劑盒,下表中列出的支原體物種均為陽性,其他微生物或真核細(xì)胞均為陰性,無交叉反應(yīng))。
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