煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（nicotinamide adenine dinucleotidephosphate，簡稱nadp）與nad的不同之處只在于其分子有一個額外的磷酸基，nadph是它的還原形式。nadp+參與生物合成反應，如脂質和核酸的合成。在動物細胞中，戊糖磷酸途徑的氧化階段是nadph的極重要來源。nadp/nadph的定量測定在細胞或組織的能量轉化和氧化還原狀態(tài)的研究中具有重要應用價值。
艾美捷nadp/nadph檢測試劑盒（熒光法）：
目錄代碼：ba0107
包裝尺寸：100assays
僅供研究使用
nadp/nadph檢測試劑盒應用程序
直接測定：細胞或組織提取物中nadp’/nadph的濃度和比率。
nadp/nadph檢測試劑盒主要功能：
1、靈敏準確。96孔板法檢測限為0.01μm，線性高達1μm nadp+/nadph。實用的該程序包括添加一種工作試劑，并在時間0和30讀取熒光
zui低室溫測定。
2、高吞吐量。可作為每天數千個樣品的高通量96孔板法容易地自動化。
儲存條件：這套裝備是用冰塊裝運的。將所有試劑儲存在20°c的溫度下。保質期：收到后6個月。
注意事項：試劑僅供研究使用。使用試劑時，應采取實驗室試劑的常規(guī)預防措施。有關詳細信息，請參閱材料安全數據表。
一般注意事項：
1.在這些濃度下，nadp’和nadph的標準曲線是相同的。由于溶液中的nadph不穩(wěn)定，我們只提供nadp作為標準。
2.該測定基于酶催化的動力學反應。工作試劑的添加應迅速，混合應簡短但徹-底。建議使用多通道移液器。
3.以下物質會干擾樣品制備，應避免使用。edta（>0.5 mm）、抗壞血酸、sds（>0.2%）、疊-氮-化-鈉、np-40（>1%）和tween-20（+1%）。
程序
1.樣品制備。對于每個樣品重量約為20 mg的組織，用冷pbs清洗。對于細胞樣品，用冷pbs洗滌細胞，每個樣品用約105個細胞沉淀。將樣品（組織或細胞）在1.5 ml eppendorftube中用100μl nadp提取緩沖液（用于nadp測定）或100μl nadph提取緩沖液均勻化（用于nadph測定）。將提取物在60°c下加熱5分鐘，然后加入20μl測定緩沖液和100μl反向提取緩沖液以中和提取物。短暫渦旋并以14000rpm旋轉樣品5分鐘。使用上清液進行nadp’/nadph測定。nadp+和nadph濃度的測定需要從兩個單獨的樣品中提取。
2.校準曲線。準備500ml 1µm nadp+預混物，混合5ml 1mm標準和4995ml蒸餾水。稀釋標準品如下：
3.樣品。在單獨的孔中，每孔添加50μl樣品。
4.試劑制備。對于每個反應井，通過混合40μl測定緩沖液、1μl酶a、1μl-酶b、10μl葡萄糖和5μl探針來制備工作試劑。建議重新配制。
5.反應。每孔快速加入50μl工作試劑。輕敲盤子攪拌。
6.在室溫下孵育30分鐘后，在λev/em=530/585 nm下讀取時間“零”（fo）和f3o的熒光。在培養(yǎng)過程中，請保護培養(yǎng)板免受光照。
文獻參考：
1.zhao, z, hu, x and ross cw (1987). comparison of tissue preparation methods for assay of nicotinamide coenzymes.plant physiol.84:987-988.
2.matsumura, h. and miyachi s (1980). cycling assay for nicotinamide adenine dinucleotides. methods enzymol. 69:
465-470.
3. vilcheze, c et al.(2005). altered nadh/nad+ ratio mediates coresistance to lsoniazid and ethionamide inmycobacteria. antimicrobial agents and chemotherapy.49(2): 708-720.