人促腎上腺皮質(zhì)激素(acth)elisa試劑盒
(用于血清、血漿、組織勻漿、細胞培養(yǎng)上清液和其它生物體液內(nèi))
一、原理：
本實驗采用雙抗體夾心 abc-elisa法。用抗人 acth 單抗包被于酶標(biāo)板上，標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的 acth與單抗結(jié)合，加入*化的抗人acth，形成免疫復(fù)合物連接在板上，辣根過氧化物酶標(biāo)記的streptavidin與*結(jié)合，加入底物工作液顯藍色，后加終止液硫酸，在450nm處測od值，acth濃度與od值成正比，可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中acth濃度。
二、試劑盒組成（2-8℃保存）
酶標(biāo)板（coated wells）
96孔
酶標(biāo)抗體工作液（enzyme conjugate）
12ml
10×標(biāo)本稀釋液（sample buffer）
12ml
20×濃縮洗滌液（wash buffer）
50ml
標(biāo)準(zhǔn)品（standards）2ng/ml
1瓶
底物工作液（tmb solution）
12ml
抗體工作液（biotinylated antibody）
6ml
終止液（stop solution）
12ml
三、準(zhǔn)備試劑俞收集血樣：
10×標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋（示例：1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水）。收集標(biāo)本：血清、血漿（edta、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測，2-8℃保存48小時；更長時間須冷凍（-20 ℃或-70 ℃）保存，避免反復(fù)凍融。血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清可能需要稀釋,請先做預(yù)實驗,以確定稀釋倍數(shù)。標(biāo)準(zhǔn)品液配制：取8個1.5ml離心管，管加標(biāo)本稀釋液900ul，第二至第八管加入標(biāo)本稀釋液500ul。在管中加入2ng/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液100ul置于漩渦混合器上混勻后用加樣器吸出500ul，移至第二管。如此反復(fù)作對倍稀釋，從第七管中吸出500ul棄去。第八管為空白對照。洗滌液：用重蒸水1:20稀釋（示例：1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水）四、檢測程序：
加樣：每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100ul，將反應(yīng)板充分混勻后置37℃40分鐘。洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次，向濾紙上印干。每孔加入蒸餾水和抗體工作液各50ul(空白除外)。將反應(yīng)板充分混勻后置37℃20分鐘。洗板：同前。每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul。將反應(yīng)板置37℃10分鐘。洗板：同前。每孔加入底物工作液100ul，置37 ℃暗處反應(yīng)15分鐘。每孔加入100ul終止液混勻。30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm處測吸光值。?五、結(jié)果計算與判斷：
所有od值建議減除空白值后再行計算。如空白od低于0.1，也可以直接計算。以標(biāo)準(zhǔn)品200、100、50、25、12.5、6.25、3.12、0 pg/ml為橫坐標(biāo)，od值為縱坐標(biāo)，使用軟件作圖，畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)樣品od值計算出相應(yīng)acth含量即可。軟件可以向本公司郵件索取。?六、試劑盒性能：
1.靈敏度：小的acth 檢測濃度小于2pg/ml。
2.特異性：可同時檢測重組或天然的人acth。不與人其它細胞因子有交叉反應(yīng)。
3.重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10％。
七、注意事項：
1. 以上標(biāo)準(zhǔn)孔及待測樣品均建議做復(fù)孔，每次測定應(yīng)同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線。
2. 洗滌過程很關(guān)鍵。洗滌不充分將導(dǎo)致度誤差及od值錯誤地升高。
3. 檢測時所有試劑都要恢復(fù)到室溫。板條開封后剩余板條要再封好，保持板條干燥。
4. 試劑盒使用超敏tmb溶液，若顯色過深會出現(xiàn)絮狀物，屬正?，F(xiàn)象，不影響結(jié)果判讀。
5. 說明書中試劑盒組成為96t的量，48t的量應(yīng)減半!
6. 本試劑盒宜置4oc冰箱保存。僅用于科研，不能用于臨床診斷！