操作步驟：
1.用移液器吸走原培養(yǎng)基，加入適量pbs洗1-2遍；
2.加入適量胰酶，置于培養(yǎng)箱中消化；
3.待消化到位后加入適量血清或培養(yǎng)基終止消化，800-1000rpm離心3-5min；
4.配制凍存液，待細胞離心后去上清，加入凍存液重懸，轉(zhuǎn)移到凍存管中；
5.將凍存管放入程序降溫盒中，-80度過夜，然后轉(zhuǎn)移到液氮中保存。
注意細節(jié)：
1.凍存步驟中包含了消化的大部分步驟，注意細節(jié)相同
2.凍存液常規(guī)配比為培養(yǎng)基：血清：dmso=7:2:1，如果細胞比較珍貴，可以調(diào)整為血清：dmso=9:1；
3.如果沒有程序降溫盒，可以將凍存細胞依次放于4度1h，-20度2h，-80過夜，大部分細胞也可以適應，但原代細胞不建議這么處理；
4.凍存細胞儲存在-80度中通常不建議超過半年，液氮中通常不建議超過2年；
5.細胞如果是第一次養(yǎng)，建議至少凍存兩個批次以上，以盡量避免因為凍存問題導致細胞絕種；