細胞：h1688細胞
中文名稱：人小細胞肺癌細胞
生長特性：貼壁細胞
來源：atcc細胞庫
培養(yǎng)基：1640培養(yǎng)基 血清：10%fbs（gibco胎牛血清）
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細胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程（ 請嚴格遵照無菌操作）
1． 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，pbs 緩沖液潤洗細胞兩次，加 2-3 ml 0.25% yi酶進行消化細胞（注意把握消化時間，通?？刂圃?1-2min）
2． 鏡下觀察消化情況，在細胞邊緣縮小，貼壁松動時（不建議消化到細胞漂?。┤サ魕i酶，加 6~8ml 培養(yǎng)基，輕輕吹打細胞層，盡量把細胞層吹落，吹散。
3． 取部分細胞懸液轉移到新的培養(yǎng)皿/瓶中，添加適當?shù)呐囵B(yǎng)基，把細胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4． 注意培養(yǎng)基 ph 值變化情況，定期換液（每周 2-3 次），待細胞密度達到 80%以后重復 1 項操作或者凍存。
（adv）核酸擴增檢測：
計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10,000rpm離心10s，向設定的n個pcr反應管中分別加入26μl，向每管中加入處理后樣品(所獲得的cdna樣品)或adv–陽性質控品(使用前用陰性質控品梯度稀釋10倍、100倍、1000倍，記為1×10p6pcopies/ml，1×10p5pcopies/ml，1×10p4pcopies/ml)和陰性質控品4μl，10,000rpm瞬時離心30秒。將各反應管放入定量pcr儀器的反應槽內，按對應順序設置陰性控品，陽性定量標準品以及未知標本，并設置反應體積(30μl)、樣品名稱、標記熒光基團種類(報告基團為fam，淬滅基團為tamra)和循環(huán)條件：
abi prism 7700，abi prism5700，abi geneamp 7000 (需要剪掉反應蓋)，abi prism7300/7500(使用8聯(lián)管)，mj opticon(使用8聯(lián)管)等使用薄壁管的儀器，循環(huán)條件：94℃→2分鐘，后93℃ 30秒→55℃ 45秒， 40個循環(huán)。
lightcycler等使用毛細管的儀器，循環(huán)條件：94℃→2分鐘，后93℃ 5秒→56℃ 45秒，共40個循環(huán)。
結果分析判定:
反應結束后保存檢測數(shù)據(jù)文件。根據(jù)分析后圖像調節(jié)baseline的start值（3-8），stop值（13-18）以及threshold值，使std curve 窗口下的標準曲線達到最佳（correlation數(shù)值介于-0.97~-1之間，correlation數(shù)值等同于∣r∣值），最后到reporter窗口下記錄儀器自動分析計算出的未知標本數(shù)值（qty-copies/ml）。
關鍵詞：培養(yǎng)箱