熒光定量pcr實(shí)驗(yàn)中的空白對照
無模板空白對照
ntc是指不含有模板(陽性模板或者陰性模板)的對照。目前的試劑盒的nc一般都是水或陰性緩沖液,所以nc等同于ntc。其實(shí)兩者有不同的作用。
儀器空白對照
ntc是含有引物探針和反應(yīng)液主要監(jiān)控引物探針,反應(yīng)體系有沒有被污染。這里的儀器空白對照我通常使用的是空反應(yīng)管來監(jiān)控儀器有無非特異性的熒光信號。
熒光染料對照
最常使用的是rox染料,由于熒光定量pcr的熒光信號在每個(gè)樣品孔會(huì)有微小的差異所以使用特定的rox熒光染料,系統(tǒng)可以根據(jù)rox熒光染料的信號值來校準(zhǔn)每孔的熒光信號。