紅色熒光蛋白hcred1(應(yīng)用于亞細(xì)胞標(biāo)記)
hcred1是從紫點(diǎn)??鹔eteractis crispa分離出來的,已經(jīng)商業(yè)化應(yīng)用。hcred1來自于通過突變改造可以吸收紅光的非熒光生色蛋白,改造后可以產(chǎn)生微弱的熒光二聚體,最大吸收值在588nm,最大發(fā)射光為618nm。雖然這個(gè)蛋白的熒光發(fā)射譜可以與dsred分開,但是它易于跟dsred共凝集,亮度也不夠。將兩個(gè)分子縱列起來改造hcred原則上可以克服二聚化,但是兩個(gè)分子配對(duì)更易于產(chǎn)生單體標(biāo)簽。
較為常用的熒光蛋白是綠色熒光蛋白(gfp)。將gfp編碼序列與目的蛋白編碼序列融合構(gòu)成融合基因后,通過基因槍法、顯微注射法、電轉(zhuǎn)化等細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù),轉(zhuǎn)染合適的細(xì)胞。利用目的基因的基因表達(dá)調(diào)控機(jī)制,如啟動(dòng)子和信號(hào)序列來調(diào)控融合基因的表達(dá),通過熒光顯微鏡觀察gfp在組織或亞細(xì)胞中的分布即可確定目的蛋白在細(xì)胞中的定位。
目的基因與gfp基因的融合有兩種方式∶①gfp位于目的基因后面,即目的基因-gfp;②gfp位于目的基因前面,即gfp-目的基因。構(gòu)建方式的選擇要視具體蛋白具體分析,不能影響目的蛋白的定位和功能。
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以上資料來自小編msq,2023.09.28
以上文中提到的產(chǎn)品僅用于科研,不能用于人體及其他用途。