熒光定量pcr的基本原理就是在pcr擴(kuò)增過(guò)程中，隨著pcr循環(huán)數(shù)的遞增，pcr產(chǎn)物不斷積累，熒光信號(hào)也會(huì)相應(yīng)的增加，這樣就可以通過(guò)熒光強(qiáng)度的變化來(lái)對(duì)pcr反應(yīng)進(jìn)行實(shí)時(shí)的監(jiān)測(cè)。探針?lè)晒鈖cr檢測(cè)試劑盒通過(guò)對(duì)dna或rna的熒光定量pcr監(jiān)測(cè)，可以實(shí)現(xiàn)基因的相對(duì)定量、定量和定性分析。
熒光是指一種光致發(fā)光的冷發(fā)光現(xiàn)象。當(dāng)某種常溫物質(zhì)經(jīng)某種波長(zhǎng)的入射光照射，吸收光能后進(jìn)入激發(fā)態(tài)，并且立即退激發(fā)并發(fā)出比入射光的波長(zhǎng)長(zhǎng)的出射光。其原理為：光照射到某些原子時(shí)，光的能量使原子核周?chē)囊恍╇娮佑稍瓉?lái)的軌道躍遷到了能量更高的軌道，即從基態(tài)躍遷到第一激發(fā)單線態(tài)或第二激發(fā)單線態(tài)等。第一激發(fā)單線態(tài)或第二激發(fā)單線態(tài)等是不穩(wěn)定的，所以會(huì)恢復(fù)基態(tài)，當(dāng)電子由第一激發(fā)單線態(tài)恢復(fù)到基態(tài)時(shí)，能量會(huì)以光的形式釋放，所以產(chǎn)生熒光。與傳統(tǒng)pcr一樣，探針?lè)晒鈖cr檢測(cè)試劑盒反應(yīng)在溫度模塊里循環(huán)進(jìn)行；理論上每經(jīng)過(guò)一個(gè)循環(huán)目的基因的數(shù)量都會(huì)增加一倍；每個(gè)循環(huán)結(jié)束后，定量pcr儀器通過(guò)不同的濾光片記錄熒光信號(hào)；在擴(kuò)增過(guò)程中，熒光信號(hào)隨著pcr產(chǎn)物的增加而增強(qiáng)。
探針?lè)晒鈖cr檢測(cè)試劑盒探針?lè)ǖ谋举|(zhì)是利用了熒光共振能量轉(zhuǎn)移現(xiàn)象，探針上存在一對(duì)能產(chǎn)生熒光共振能量轉(zhuǎn)移的基團(tuán)，利用pcr反應(yīng)中的一些過(guò)程(酶切，雜交等)，使兩個(gè)基團(tuán)的距離產(chǎn)生變化，使系統(tǒng)中的熒光強(qiáng)度或者熒光種類(lèi)發(fā)生變化，這種變化又與pcr產(chǎn)物的種類(lèi)和量有直接關(guān)系，通過(guò)檢測(cè)這種變化，我們就可以檢測(cè)出pcr反應(yīng)體系中產(chǎn)物的種類(lèi)和量。