核基質(zhì)是指真核細(xì)胞間核中除核被膜、染色體和核仁以外的一個(gè)精密網(wǎng)架系統(tǒng)，既包含蛋白質(zhì)，又包含rna。核基質(zhì)是從純化的細(xì)胞核中分離的。要用去污劑、核酸酸處理細(xì)胞核。以分離核基質(zhì)的每一步中抑制核酸酶的活性非常重要。
本文介紹1986年comerford使用過的分離細(xì)胞核基質(zhì)的方法和步驟。
1. 大鼠肝臟(50~100g)剪碎，加3倍體積的10mmol/l tris-hcl、2mmol/l mgcl2、250mmol/l蔗糖、1mmol/l edta、1mmol/l pmsf(ph=7.4，4℃)。勻漿后通過幾層紗布過濾，在4℃，勻漿液以800gmax(用的是mse chilspin離心機(jī)，4*100ml轉(zhuǎn)子，2100r/min)離心10分鐘。把沉淀重新懸浮在勻漿緩沖液里，該緩沖液包含56%(質(zhì)量濃度)蔗糖，再在4℃以60000gmax(用sorvall otd50超速離心機(jī)，a641轉(zhuǎn)子，28000r/min)離心90分鐘。把沉淀用20ml勻漿緩沖液洗兩次。
2. 把細(xì)胞核沉淀重新懸浮在20ml stem緩沖液中[stem：50mmol/l tris-hcl，50mmol/l mgcl2、250mmol/l蔗糖、1mmol/l egta、1mmol/l pmsf(ph=7.4，4℃)]，加入四硫酸鈉，終濃度為0.2mmol/l。在4℃孵育后，加入n-乙酰馬來酰亞胺(n-ethylmaleimide，nem)，終濃度為5mmol/l。
3. 在800 gmax離心沉淀細(xì)胞核，并用20ml stem洗三次，把細(xì)胞核重新懸浮在20ml stem中，補(bǔ)加20μg/ml dnase i(boehringer, grade i)，在37℃孵育20分鐘，再在800 gmax離心回收沉淀。
4. 把沉淀懸浮在20ml ls緩沖液里[ls緩沖液：10mmol/l tris-hcl，0.2mmol/l mgcl2、1mmol/l egta、10mmol/l pmsf(ph=7.4，4℃)] ,在4℃孵育10分鐘, 再在800 gmax離心10分鐘回收沉淀。
5. 把沉淀重新懸浮在1ml 含有70%(質(zhì)量濃度)蔗糖的ls緩沖液里。上面鋪放3層蔗糖梯度，各2ml 60%，50%和40%(質(zhì)量濃度)蔗糖(用含2mol/l nacl的ls緩沖液配制蔗糖溶液)。在800 gmax離心1小時(shí)，細(xì)胞核基質(zhì)在40%和50%蔗糖分離界面?；厥蘸笥胹tem緩沖液(10ml)洗一次。
該方法可用于各種類型細(xì)胞核基質(zhì)的分離。