nanodrop是實(shí)驗(yàn)室中常見(jiàn)的分光光度計(jì)。與傳統(tǒng)需要比色皿的分光光度計(jì)相比，nanodrop所需樣品的體積大大減少，只需要2 μl，同時(shí)也大大降低了實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備以及清洗的時(shí)間。這些優(yōu)勢(shì)使得科研人員能夠在一分鐘內(nèi)檢測(cè)多個(gè)樣品。當(dāng)然如果你有更多的樣品，還嫌效率不夠高，你可以選擇應(yīng)用nanodrop 8000系統(tǒng)，它能夠同時(shí)檢測(cè)8個(gè)樣品。
nanodrop能夠在包括紫外及可見(jiàn)光區(qū)域在內(nèi)的光譜范圍內(nèi)檢測(cè)樣品的吸光度信號(hào)。在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，需要在儀器的軟件內(nèi)設(shè)置檢測(cè)樣品的種類(lèi)，包括蛋白質(zhì)，dna, rna等。根據(jù)吸光度,能夠計(jì)算樣品的濃度。dna及rna 在260 nm處有大吸收度，蛋白質(zhì)在280 nm處有大吸收峰值。濃度與吸光度的對(duì)應(yīng)關(guān)系見(jiàn)下表。當(dāng)然表中濃度與吸光度對(duì)應(yīng)關(guān)系成立的前提是樣品必須具有很高的純度。樣品純度可以通過(guò)a260/280判定，其臨界值可參考下表。 大家可能注意到，rna的a260/280比值要比dna的值高一些，這是因?yàn)閴A基u的a260/280的比值要比堿基t的a260/280比值更高。
吸光度
樣品
樣品濃度
高純度樣品標(biāo)準(zhǔn)（a260/280）
a260=1
雙鏈dna
50 μg/ml
<1.8
單鏈dna
33μg/ml
單鏈rna
40μg/ml
>2.0
a280= 1
蛋白質(zhì)
1 mg/ml
<0.6
對(duì)nanodrop檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生直接影響的因素就是樣品的純度。a260/280是檢測(cè)樣品純度的一個(gè)指標(biāo)，但這個(gè)參數(shù)只衡量了蛋白質(zhì)與核酸之間相互污染的情況。沒(méi)有考慮dna與rna之間彼此污染以及其他物質(zhì)污染的情況，比如*在270 nm附近具有較大的吸光值。
因此在利用nanodrop檢測(cè)核酸濃度的時(shí)候，除了a260/280外，a260/230也是檢測(cè)樣品純度的一個(gè)指標(biāo)，高純度dna和rna的兩個(gè)臨界值同樣是1.8以及2.0。a260/230在2.0-2.2之間是合理的數(shù)值。對(duì)于純的核酸，a260/230的值通常大于a260/280的值。核酸提取過(guò)程中殘留的有機(jī)物通常會(huì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生影響。如果檢測(cè)結(jié)果顯示230nm處具有很大的吸光值，樣品很有可能被edta，碳水化合物或者硫氰酸胍等物質(zhì)污染了。
nanodrop的檢測(cè)范圍。對(duì)于核酸來(lái)說(shuō)，nanodrop的檢測(cè)濃度范圍在2ng-15μg/μl之間。所以當(dāng)樣品的濃度很低時(shí)，比如從單個(gè)或少量細(xì)胞中提取的dna或rna，利用nanodrop來(lái)測(cè)量濃度可能就不適合了。這時(shí)需要考慮其他的核酸定量方法比如熒光染料的方法。