轉(zhuǎn)染，是將外源性基因?qū)爰?xì)胞內(nèi)的一種專門技術(shù)。隨著基因與蛋白功能研究的深入，轉(zhuǎn)染目前已成為實驗室工作中經(jīng)常涉及的基本方法。細(xì)胞轉(zhuǎn)染是指將外源分子如dna，rna等導(dǎo)入真核細(xì)胞的技術(shù)。應(yīng)用在研究基因功能、調(diào)控基因表達(dá)、突變分析和蛋白質(zhì)生產(chǎn)等生物學(xué)試驗中。
細(xì)胞轉(zhuǎn)染實驗一般過程步驟:
1.轉(zhuǎn)染試劑的準(zhǔn)備
① 將400ul去核酸酶水加入管中，震蕩10秒鐘，溶解脂狀物。
② 震蕩后將試劑放在-20攝氏度保存，使用前還需震蕩。
2.選擇合適的混合比例(1:1-1:2/脂質(zhì)體 體積:dna質(zhì)量)來轉(zhuǎn)染細(xì)胞。在一個轉(zhuǎn)染管中加入合適體積的無血清培養(yǎng)基。加入合適質(zhì)量的myod或者egfp的dna，震蕩后在加入合適體積的轉(zhuǎn)染試劑，再次震蕩。
3.將混合液在室溫放置10―15分鐘。
4.吸去培養(yǎng)板中的培養(yǎng)基，用pbs或者無血清培養(yǎng)基清洗一次。
5.加入混合液，將細(xì)胞放回培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一個小時。
6.到時后，根據(jù)細(xì)胞種類決定是否移除混合液，之后加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24-48小時。
關(guān)鍵詞：培養(yǎng)箱