摘要： 本文在 thermo scientific™ 全新液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜三重四極桿平臺(tái) thermo scientific™ tsq™ 上針對(duì)國(guó)標(biāo) sn/t 2222-2008 中皮質(zhì)激素、sn/t 2677-2010 中雄激素以及臨 床研究中常檢的孕激素和雌激素共計(jì) 8 種激素類(lèi)藥物建立了 快速液質(zhì)檢測(cè)方法。8 種激素類(lèi)藥物在其相應(yīng)的濃度范圍內(nèi) 線性關(guān)系良好（r2>0.99），lod 均能滿足國(guó)標(biāo)對(duì)激 素類(lèi)藥物殘留的檢測(cè)要求。本方法對(duì)激素藥物的殘留檢測(cè)及 臨床檢測(cè)具有指導(dǎo)意義。
引言 激 素 類(lèi) 藥 物 主 要 包 括 雄 激 素（androgens）、 雌 激 素（estrogens）、 孕 激 素（progestogens）、 糖 皮 質(zhì) 激 素 （glucocorticoids）等，因其具有影響動(dòng)物性別分化，縮短 生長(zhǎng)周期，促進(jìn)毛發(fā)生長(zhǎng)及恢復(fù)皮膚彈性等作用，常被非法 添加于各種動(dòng)物源食品及化妝品中。研究表明，兒童性早熟、 婦女子宮癌、卵巢癌等疾病發(fā)病率的上升均與濫用此類(lèi)藥物 有關(guān)，因此 cec、歐盟、國(guó)標(biāo)、日本等均對(duì)動(dòng)物源食品中激 素類(lèi)藥物殘留*作出了嚴(yán)格要求。國(guó)標(biāo)sn/t 2222-2008 及 sn/t 2677-2010 也分別對(duì)進(jìn)出口動(dòng)物源性食品中糖皮質(zhì) 激素類(lèi)獸藥殘留量及雄性激素類(lèi)藥物殘留量檢測(cè)方法做了相 關(guān)規(guī)定。
激素作為由內(nèi)分泌腺或內(nèi)分泌細(xì)胞分泌的內(nèi)源性生物活性物 質(zhì)，在體內(nèi)作為信使傳遞信息，通過(guò)調(diào)節(jié)各種組織細(xì)胞的代 謝活動(dòng)從而影響人體的生理活動(dòng)。雖然激素在人體內(nèi)的含量 很低，但卻對(duì)人類(lèi)健康有很大的影響，缺乏或過(guò)多都會(huì)引發(fā) 各種疾病。因此，臨床上檢測(cè)人體多種激素的含量對(duì)于疾病 的診斷具有重大意義。本文針對(duì)皮質(zhì)激素、孕激素、雄激素、 雌激素類(lèi)共 8 種激素類(lèi)藥物建立了快速液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢 測(cè)方法，既可為激素類(lèi)藥物殘留量測(cè)定提供技術(shù)保障，亦可 為激素的臨床檢測(cè)提供方法借鑒。
2. 實(shí)驗(yàn)部分
2.1. 儀器與試劑 thermo scientific™ vanquish™ binary horizon 超液相 色譜儀
賽默飛quantis 三重四極桿質(zhì)譜儀
甲醇（色譜純，美國(guó) thermo fisher 公司）；實(shí)驗(yàn)用水為 milli-q 去離子水；nh4oh（色譜純，sigma）
2.2. 化合物信息及溶液配制 2.2.1 8 種激素類(lèi)化合物及其對(duì)應(yīng)內(nèi)標(biāo)物信息（見(jiàn)表 1）
2.2.2 取適量激素類(lèi)化合物標(biāo)準(zhǔn)品混合儲(chǔ)備液，稀釋成濃度 在 0.01 ng/ml - 500 ng/ml 范圍的標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)液質(zhì)聯(lián)用儀 器分析。
2.3. 色譜條件： 色譜柱：thermo scientific™ accucore™ rp-ms （2.6 µm, 100×2.1 mm）；柱溫：40℃；進(jìn)樣量：5 µl；流動(dòng)相：a 為水（含0.05% nh4oh），b 為甲醇，梯度洗 脫程序（見(jiàn)表 2）
2.4. 質(zhì)譜條件： 可加熱電噴霧電離源（hesi），正、負(fù)離子切換掃描模式； 掃描方式：srm；噴霧電壓 (+/-): 3500/2500v；離子傳輸管 溫度：350℃；鞘氣壓力 30 arb；輔助氣壓力 10 arb；離子源溫度：350℃；碰撞氣壓力：2 mtorr；選擇反應(yīng)監(jiān)測(cè)離子 對(duì)信息見(jiàn)表 3。
表 3. 8 種化合物及質(zhì)譜采集參數(shù) table 3 ms/ms parameters of 8 compounds and internal standard
3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
3.1 靈敏度測(cè)試 采用上述儀器分析方法，8 種激素類(lèi)化合物及其內(nèi)標(biāo)物在 7 分鐘內(nèi)均可獲得良好的色譜峰，圖1 為 8 種激素類(lèi)化合物 在 lo處的選擇離子流提取圖，各化合物靈敏度測(cè)試結(jié)果 見(jiàn)表 4。
3.2 線性范圍測(cè)試 采用上述儀器分析方法，對(duì) 8 種激素類(lèi)化合物進(jìn)行線性范圍 測(cè)試，線性相關(guān)系數(shù) r2 均 ≥ 0.99，線性關(guān)系良好。8 種激素 類(lèi)化合物線性方程及線性相關(guān)系數(shù)結(jié)果見(jiàn)表 4，選取部分化 合物線性方程圖見(jiàn)圖 2。
3.3. 儀器相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差 rsd 性能展示 采用上述儀器分析方法，對(duì)8 種激素類(lèi)化合物進(jìn)行相對(duì)標(biāo) 準(zhǔn)偏差測(cè)試（n=6）實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明8 種化合物相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差rsd% 均 ≤ 5% 其中，雄烯二酮50 pg/ml (n=6) rsd% 為 3.39%；100 pg/ml (n=6) rsd% 為 1.04%（圖 3）
4. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論 本文建立了三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用儀（quantis）分析8 種激素類(lèi)藥物的檢測(cè)方法。由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，基于quantis 建立的檢測(cè)方法不僅具有優(yōu)異的靈敏度和線性范圍 同時(shí)具備優(yōu)異的重現(xiàn)性，本方法可用于激素類(lèi)藥物的日常分 析檢測(cè)。