操作過程的控制:
⑴ 嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作。操作前將試劑在室溫下平衡30~60min。
⑵ 加樣后及時放人孵箱。標(biāo)本較多時,要分批操作。按說明步驟嚴(yán)格控制操作時間,防止孵育時間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。
(3)封板溫育時,各孔一定要封嚴(yán),防止陽性標(biāo)本的液體蒸發(fā),產(chǎn)生周邊現(xiàn)象從而導(dǎo)致“花板”的出現(xiàn)。
(4)用洗板機洗板時,保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干:還要防止針口有纖維蛋白或異物,這些異物在洗板的過程中易產(chǎn)生拖帶現(xiàn)象而導(dǎo)致“花板”的出現(xiàn)。
(5)合理安排檢測量,以免反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。
(6)加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干。
(7)顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍(lán)色的tmb顯色劑不用。
(8)加樣時保持顯色劑不外流;a、b液應(yīng)避免接觸金屬器械。加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
(9)應(yīng)保證c清潔,整個操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸。人elisa試劑盒以上的措施可以使“花板”降至zui低限度。從而提高檢測的特異性。并得到更準(zhǔn)確、可靠的實驗結(jié)果。
人elisa試劑盒的主要組成成份是什么呢?根據(jù)elisa試劑盒的應(yīng)用范圍,可將elisa試劑盒分為拿幾種呢?
完整的elisa試劑盒主要的組成成份如下:
(1)已包被抗原或抗體的固相載體(免疫吸附劑);
(2)c的抗原或抗體(結(jié)合物);
(3)酶的底物;
(4)陰性對照品和陽性對照品(定性測定中),參考標(biāo)準(zhǔn)品和控制血清(定量測定中);
(5)結(jié)合物及標(biāo)本的稀釋液;
(6)洗滌液,在板式人elisa試劑盒中,常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水;
(7)酶反應(yīng)終止液,常用的hrp反應(yīng)終止液為硫酸,其濃度按加量及比色液的zui終體積而異,在板式elisa中一般采用2mol/l。