以粗壯女貞嫩芽為材料,對粗壯女貞rapd分析中一些重要影響因素,包括模板dna濃度、dntps濃度、mg^2＋濃度、taq酶用量、退火溫度、延伸時間以及循環(huán)次數(shù)等因子進(jìn)行了比較系統(tǒng)的摸索和優(yōu)化.建立了適合粗壯女貞rap-pcrd分析的優(yōu)化反應(yīng)體系：即25μl 反應(yīng)體系中mg2＋濃度為2.5mm,dntps濃度為200μm,taq酶用量為2.0u,引物濃度為10pmol,模板濃度為80ng.pcr擴(kuò)增程序為：94℃預(yù)變性4min,然后按94℃變性30s,37℃退火45s,72℃延伸120s,進(jìn)行40個循環(huán),最后于72℃延伸10min.以該優(yōu)化的rapd條件進(jìn)行重復(fù)實驗,其實驗結(jié)果重現(xiàn)性良好.完成機(jī)構(gòu)：[1]貴州省茶葉科學(xué)研究所,貴州湄潭564100 [2]海南大學(xué)苦丁茶研究所,海南?？?70228