1、取材植物體的各個(gè)部位皆可培表,但根據(jù)需要培養(yǎng)的難易,對(duì)不同植物則有所區(qū)別。莖尖是利用最多的部位。根據(jù)不同的需要還可取葉片、花、花?;蚧üR秆俊⒏?、莖等。通常應(yīng)改初生幼嫩的材料,其分生能力強(qiáng)。
2、消毒
組織培養(yǎng)用的材料大多取自田間,帶有大量雜菌,這是無菌培養(yǎng)的大障礙,為此,需嚴(yán)治地進(jìn)行消毒滅菌。取材后先將泥土洗凈,再在自來水中沖洗10~2o分鐘,然后轉(zhuǎn)入無菌條件進(jìn)行消毒。
3、接種培養(yǎng)
接種的培養(yǎng)材料在消毒濾紙上切成所需大小,通常約幾毫米大小,中國(guó)蘭花莖尖應(yīng)在0.2毫米以下,為此,需在解剖鏡下操作。工具用完即應(yīng)在95%灑精中沾一下,然后用火焰消毒法消毒,避免工具帶菌造成交叉污染。材料接種后將培養(yǎng)瓶移入培養(yǎng)室,放在培養(yǎng)架上進(jìn)行培養(yǎng)。
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│組織│消毒順序│備注│
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││消毒前│消毒│消毒后││
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│種子│純酒精中浸10分│10%次氯酸鈣浸│九菌水洗3次,在│用幼根或幼芽│
││鐘,再用無菌水漂│20~30分鐘,再用│無菌水中發(fā)芽。或│來產(chǎn)生愈傷組│
││洗│1%溴水浸5分鐘│用無菌水洗5次。│織│
││││在濾紙上發(fā)芽││
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│果實(shí)│飩酒精迅速漂洗│2%次氯酸鈉浸10│無菌水反復(fù)沖洗,│獲得無菌苗│
│││分鐘│再剖除種子或內(nèi)部││
││││組織││
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│莖切段│自來水洗凈,再用│2%次氯酸鈉浸15│無菌水洗3次│直立在瓊脂培│
││沌酒精漂洗│一30分鐘││養(yǎng)基上或切取│
│││││出組織進(jìn)行培│
│││││養(yǎng)│
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│貯藏器官│自來水洗凈│2%次氯酸鈉浸20│無菌水洗3次、濾│從消毒材料向│
│││~30分鐘│紙吸干│都取出組織來│
│││││培養(yǎng)│
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│葉片│自來水洗凈,吸干,│0.1%氯比汞浸1│無菌水反復(fù)沖洗,│選用嫩葉,葉│
││再用純酒精漂洗│分鐘或2%次氯酸│濾紙吸干│片平放在瓊脂│
│││鈉浸15一20分鐘││上,或葉片插│
│││││在瓊脂中│
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(王懷宇)