食品中三聚氰胺的污染事件是近來(lái)社會(huì)關(guān)注的熱點(diǎn)。從去年出口美國(guó)的寵物飼料中被檢測(cè)出三聚氰胺到現(xiàn)在發(fā)現(xiàn)我國(guó)幾十種品牌的奶制品均受三聚氰胺的污染。無(wú)不引起人們對(duì)食品安全的擔(dān)擾，也引發(fā)了一股開(kāi)發(fā)研究三聚氰胺檢測(cè)方法的熱潮。
三聚氰胺是一種重要的氮雜環(huán)有機(jī)化工原料，水溶液顯弱堿性，能溶于甲醇、乙酸等，微溶于水和乙醇，不溶于乙醚、苯等，而且在傳統(tǒng)c18柱上保留很差。利用此特性，人們普遍采用離子對(duì)試劑液相色譜法和液質(zhì)聯(lián)用方法進(jìn)行檢測(cè)。但由于食品基質(zhì)復(fù)雜，使得樣品的前處理甚為關(guān)鍵。我們采用三氯乙酸提取，mcx固相萃取小柱凈化，輔以j2加壓固相萃取儀操作，建立一套快速、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性良好的樣品外理方法。
1． 材料與方法
1.1主要儀器與試劑：agilent hp1100液相色譜儀、配四元梯度泵、在線真空脫氣機(jī)、自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱、二極管陣列檢測(cè)器、j2scientific（綠綿巨貿(mào)）公司 加壓固相萃取儀、*、離心機(jī)、固相萃取小柱：oasismcx，6ml，500mg。三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品，純度99%。
1.2樣品處理
1.2.1提取
準(zhǔn)確稱取經(jīng)粉碎混勻后樣品5.0g，加入50ml 1%三氯乙酸溶液及2ml 2%乙酸鉛溶液，混勻后超聲提取30min，高速離心后取上清液待凈化。
1.2.2凈化
將mcx固相萃取小柱（6ml，500mg）置于j2固相萃取儀樣品架上，分別加入5ml甲醇、5ml水活化，再準(zhǔn)確移取5.0ml離心液上柱。活化及上樣時(shí)，將樣品架升至頂部通過(guò)調(diào)節(jié)面板旋鈕來(lái)調(diào)節(jié)n2氣流大小，控制流速不超過(guò)1ml/min。然后再用5ml水、5ml甲醇洗滌spe柱，棄去洗脫液，將小柱升至頂部調(diào)節(jié)氣閥旋鈕自動(dòng)加壓吹干小柱，用5%氨水甲醇溶液5ml洗脫，收集洗脫液用氮吹儀吹干，用甲醇-水（2:8,v/v）定容至1.0ml,過(guò)0.45μm濾膜,上機(jī)測(cè)定。
1.3液相色譜測(cè)定：略
2．結(jié)果與討論
2.1樣品提取與凈化
三氯乙酸具有沉淀乳及其制品中蛋白質(zhì)的作用,而且有助于三聚氰胺的溶解.由于三聚氰胺呈弱堿性。（弱陽(yáng)離子化合物），采用陽(yáng)離子交換柱進(jìn)行凈化可達(dá)到去除雜質(zhì)，提高檢測(cè)靈敏度、重現(xiàn)性和回收率的效果。圖1為奶粉樣品直接提取后進(jìn)樣測(cè)定所得的色譜圖，存在許多雜質(zhì)峰，而圖2為提取并經(jīng)固相萃取小柱凈化后的色譜圖，雜質(zhì)峰的干擾基本去除。
圖1：奶粉樣品直接提取測(cè)定的色譜圖
圖2：奶粉樣品提取并經(jīng)固相萃取柱凈化的色譜圖
2.2j2綠綿巨貿(mào)公司加壓固相萃取儀的應(yīng)用
j2綠綿巨貿(mào)公司加壓固相萃取儀具有、簡(jiǎn)便的特點(diǎn)。它可通過(guò)該裝置中的氣流調(diào)節(jié)閥來(lái)控制小柱流速的大小，并可直接吹干小柱，保證每個(gè)小柱在活化洗脫過(guò)程中具有良好的重現(xiàn)性。并且可配套不同規(guī)格的固相萃取小柱（如1ml，3ml，6ml等）使用，一次操作可同時(shí)處理48個(gè)樣品。我們?cè)谀谭壑刑砑樱?.0～50.0）ug/ml等不同濃度的三聚氰胺，進(jìn)行加標(biāo)回收和重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)，回收率在95～99%之間。相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于3%。
3.結(jié)論：
j2固相萃取儀的加壓操作是通過(guò)在固相萃取小柱的上方施加一定壓力空氣或n2來(lái)實(shí)現(xiàn)。這樣可加快過(guò)濾速度，控制柱子活化、淋洗、洗脫全過(guò)程的流速，使溶液易于進(jìn)入固定相孔隙，有利于樣液與固定相更緊密接觸，從而提高萃取效果。它克服常規(guī)的手動(dòng)固相萃取操作費(fèi)時(shí)、不能確保穩(wěn)定的流速、不同人員操作結(jié)果偏差較大的問(wèn)題，通過(guò)簡(jiǎn)單的控制消除人為操作的誤差，保證在短時(shí)間內(nèi)同時(shí)處理幾十個(gè)樣品并具有良好的重現(xiàn)性。