茶樹新梢cdna文庫(kù)的構(gòu)建和ests測(cè)序成功率初步分析

發(fā)布時(shí)間：2024-02-19

報(bào)道了國(guó)內(nèi)第一個(gè)茶樹cdna文庫(kù)的構(gòu)建及其est測(cè)序成功率分析。以trizol一步法從龍井43春茶新梢中提取總rna，分離純化富含poly(a)的mrna，ld-pcr反轉(zhuǎn)錄合成雙鏈cdna，以入tripex2為載體，構(gòu)建了龍井43新梢cdna文庫(kù)。以xl1-blue為受體菌測(cè)定原始文庫(kù)的滴度為6.8×l0^5 pfu／ml，總克隆數(shù)為3.5×l0^5個(gè)，重組率為98.05％，擴(kuò)增后文庫(kù)總滴度為7.2×l0^9pfu／ml。對(duì)隨機(jī)挑取的噬菌斑進(jìn)行pcr鑒定，表明插入片段大多分布在0.5.2.0kb之間，絕大部分在1．0．1．5kb左右。文庫(kù)質(zhì)量鑒定結(jié)果表明。構(gòu)建的茶樹新梢cdna文庫(kù)具有較好的庫(kù)容量、較高的重組率以及較大的插入片段。對(duì)4320個(gè)克隆的序列測(cè)定表明，獲得有用序列2963個(gè)，測(cè)序成功率為68．5％，剔除短序列后。首批共獲得1687個(gè)茶樹ests。完成機(jī)構(gòu)：[1]中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院茶葉研究所，浙江杭州3lo008 [2]中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院研究生院，北京lo008l [3]浙江大學(xué)分析測(cè)試中心生物大分子研究室，浙江杭州3l0029