杜鵑花植物的組培技術(shù)

發(fā)布時(shí)間:2024-01-19
杜鵑花組織培養(yǎng),通常使用的外植體為莖尖、莖節(jié)和花蕾等。因花蕾的分化較為困難,周期長;莖尖的取材受到一定限制,故國內(nèi)多采用莖節(jié)為初代培養(yǎng)的外植體。
?殺菌處理時(shí),殺菌能力較強(qiáng)的升汞(氯化汞)易造成外植體材料的褐變死亡,不宜使用。試驗(yàn)表明,采用飽和的次氯酸鈣液上清液或5%的次氯酸鈉液作為滅菌劑,效果較好,處理時(shí)間為15至20分鐘。為加強(qiáng)滅菌效果,還可加入1%的克菌丹或0.1%的吐溫-20(山梨糖醇)配合使用。材料滅菌前的預(yù)處理,通常采用70%酒精浸泡,不超過30秒。此外,用中性洗滌劑進(jìn)行材料的預(yù)處理,亦可有效降低其滅菌后的污染率。外植材料滅菌流程為:洗衣粉液浸泡20分鐘?流水沖洗至清?70%酒精浸泡30秒?滅菌水沖洗1分鐘?5%次氯酸鈉浸泡15分鐘,滅菌水漂洗3次,每次1分鐘。如此,可將外植體污染率降低到15%以下。
?杜鵑花組培所用培養(yǎng)基,為andeson改良ms培養(yǎng)基:將ms培養(yǎng)基中的硝酸銨和硝酸鉀用量分別減至1/4,取消了碘化鉀成分,鐵鹽的用量增加一倍。因杜鵑花科植物原產(chǎn)于高山酸性土壤,培養(yǎng)基的ph值宜為5.0至5.4。培養(yǎng)室溫度25℃,光照強(qiáng)度3000勒克斯,光照時(shí)間12至14小時(shí)。
?杜鵑花在誘芽培養(yǎng)中使用的激素較一般植物有異,需要活性較強(qiáng)的細(xì)胞激動(dòng)素類物質(zhì),才能達(dá)到滿意的效果。試驗(yàn)表明,使用zt的誘芽效應(yīng)最為顯著;添加kt的處理幾乎無叢芽或側(cè)芽發(fā)生,僅是原莖尖的伸長;而選用6-ba處理,則導(dǎo)致培養(yǎng)材料的褐變加劇,效果反不如對照。此外,在其后的增殖培養(yǎng)中,杜鵑花對細(xì)胞激動(dòng)素種類的要求,仍以添加zt為好。
?國外在杜鵑花的組培中多使用2ip作為外源細(xì)胞激動(dòng)素,效果較zt好。但從經(jīng)濟(jì)的角度考慮,仍推薦使用zt。
?二、杜鵑花的初代和繼代增殖培養(yǎng)
?杜鵑花初代誘芽培養(yǎng),naa濃度不得超過0.1mg/l,zt用量的增大對誘芽效應(yīng)有明顯促進(jìn)作用。但提高zt濃度時(shí),naa濃度不宜同步增加,zt/naa值較大為好。從經(jīng)濟(jì)培養(yǎng)的意義出發(fā),初代培養(yǎng)的激素配比以zt5+naa0.01(mg/l)為宜,培養(yǎng)1個(gè)月左右時(shí),誘芽率即可達(dá)100%,誘芽系數(shù)6.5。
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