春蘭，自古以來，以其優(yōu)雅之香、優(yōu)美之葉和分布廣泛，一直倍受人們推崇，并成為東洋蘭系的代表種?，F(xiàn)代，又因藝葉和奇花的發(fā)現(xiàn)，引起了人們極大的興趣。但是，和其它東洋蘭一樣，因其自然分蘗繁殖速度極為緩慢，使得許多蘭花愛好者難以擁有自己所喜愛的品種。
現(xiàn)在，這個問題通過組織培養(yǎng)已能得到解決。在春蘭為代表的東洋蘭組培中，一般要經(jīng)過這樣幾個階段：1．地下莖的形成。2．地下莖的增殖。3．從地下莖形成具有葉。根和假鱗莖的完整組培苗。因此，其總的培養(yǎng)過程較之卡特蘭等西洋蘭有很大的差異，而且培養(yǎng)的時間要長得多。
下面就介紹組織培養(yǎng)的基本過程。
組織培養(yǎng)的方法
1．材料。
采用莖頂培養(yǎng)的材料一般選取健壯無病株的一年生植株，在腋芽膨大的三、四月間采取。
2．殺菌和采芽。
將假鱗莖在葉的基部2－知cn處切去根、剝?nèi)r。在自來水中充分沖洗后，在5％的重氯酸鈉或亞酸鈣中消毒10分鐘，移人無菌操作臺內(nèi)，用滅菌水沖洗三次，然后用濾紙吸去水分，置人表面皿中。
采取腋芽莖頂時，將假鱗莖以腋芽相對一倒，用2枚大頭針固定在橡膠栓上，后在實(shí)驗(yàn)顯微鏡下，將腋芽鱗片、葉片依次用解剖刀剝?nèi)?，切取腋芽?xiàng)端1－2mm長度的組織。腋芽切取一般以假鱗莖下部腋芽為佳。
運(yùn)用尚未展葉的假鱗莖，切取其莖頂組織，其操作方法與切取腋芽組織類似，只是在橡膠栓上固定的角度稍有不同。用些材料培養(yǎng)，其地下莖的形成要較腋芽為材料的要低。
3．培養(yǎng)基
一般使用添加naaippm、kto．lppm的ms培養(yǎng)基，但因春蘭不同品種對培養(yǎng)基質(zhì)反應(yīng)不同，最適宜的培養(yǎng)基配方仍須在實(shí)踐中探索。另外，春蘭培養(yǎng)一般使用含有瓊脂的固體培養(yǎng)基為宜。
4．著床
切取的莖頂應(yīng)立即將其切斷面與培養(yǎng)表面密著，而且用塞子將試管密封。因地下莖形成時間較長，因試管密封環(huán)節(jié)必須高度重視。
5．培養(yǎng)條件。
根據(jù)試驗(yàn)，在25℃條件下，黑暗狀態(tài)比照明狀態(tài)下地下莖的形成要高，且初期生長快。一般在莖頂著床3o—45日后能用肉眼觀察到地下莖，但到完全形成卻需3個月左右時間。
6．地下莖的增殖和繼代。
在地一下莖長至約1cm長度時，應(yīng)將其移植到微通氣寒栓封日的增殖培養(yǎng)基中，在500-1000lux光條件下培養(yǎng)。為利于增殖，培養(yǎng)容器一段采用5o0ml的三角燒瓶，內(nèi)注人150－200nl的培養(yǎng)基。培養(yǎng)基可選用添加naao．sppmr的京都培養(yǎng)基。
7．假鱗莖的形成
從地下莖先端到假鱗莖形成約需一年時間，培養(yǎng)基一般采用添加1ppm的naa、2ppm的ba的ms培養(yǎng)基。至含3一5片葉，1－3條根的假鱗整形成后可切離移栽。
8．馴化。
從試管中移出的幼苗可移植到水苔、云母或其它春蘭用土中。馴化一般采用兩個階段，第一階段為開始的l－2個月，在馴化室中進(jìn)行，其條件類似于培養(yǎng)室；第二階段則是近于一般種植的蘭室，但要求做到弱光、多濕、適溫條件。
二、藝葉的發(fā)現(xiàn)。
根據(jù)部分實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的結(jié)果，不同的藝葉品種經(jīng)過組織后具有明顯的差異，對于藝葉的代表種類覆輪、中透縞、虎斑來說，各具有這樣的特點(diǎn)。
1．覆輪：在組織過程中能形成兩種地下莖。綠色的地下莖能形成與親本完全一樣的植株；黃白色的地下莖則不能形成正常的植株，也難以產(chǎn)生正常的地下莖。
2．中透縞。不能形成含有親本色藝的藝葉，組培苗全部是正常綠葉的植株。因此，中透縞在目前無法通過組培來繁殖。
3．虎斑。在培養(yǎng)過程中斑藝往往難以表現(xiàn)，這主要是光線不足的緣故。在植株移栽后，只要予以適當(dāng)?shù)臈l件，新萌發(fā)的假鱗莖能表現(xiàn)出與親本完全一致的植株，其成功率約為3o％。