elisa試劑盒間接法是目前zui常用的方法之一，主要用于對病原體抗體的檢測而進(jìn)行傳染病的診斷，而該方法的操作步驟主要有：
1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃過夜；
2.次日洗滌3次；
3.加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時,洗滌；
4.（同時做空白、陰性及陽性孔對照）于反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體（抗抗體）0.1ml；
5.37℃孵育35-60分鐘，洗滌；
6.zui后一遍用ddw洗滌；
7.加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的tmb底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘；
8.終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2m硫酸0.05ml；
9.結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測od值：在elisa檢測儀上，于450nm（若以abts顯色，則410nm）處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔o(hù)d值，若大于規(guī)定的陰性對照od值的2.1倍，即為陽性。
間接法成功的關(guān)鍵在于抗原的純度，另一種干擾因素為正常血清中所含的高濃度的非特異性。