類器官免疫共培養(yǎng)實驗方法

發(fā)布時間:2025-04-07
近年來,腫瘤免疫療法在癌癥治療中非?;馃?。腫瘤免疫學治療的目的是激發(fā)或調動機體的免疫系統(tǒng),增強腫瘤微環(huán)境抗腫瘤免疫力,從而控制和殺傷腫瘤細胞。隨著免疫治療的興起也推動了腫瘤研究的發(fā)展,但是由于人源化體系的復雜性、免疫系統(tǒng)的部分或無效重組建等問題,致使免疫腫瘤模型面臨著巨大的挑戰(zhàn),臨床上迫切需要能夠用于個體化驗證療效的體外模型。類器官的出現(xiàn)給腫瘤免疫治療提供了新的契機,然而,現(xiàn)有的類器官中缺乏免疫細胞限制了其發(fā)展。
小愛這次給大家介紹一下基本的腫瘤類器官免疫共培養(yǎng)方法,如下:
1、類器官準備
1)提前一周,復蘇培養(yǎng)類器官至狀態(tài)良好;
2)取合適數量類器官,使用預冷pbs清洗數次,去除大部分基質膠;
3)使用培養(yǎng)基重懸類器官。
2、pbmc分離和類器官共培養(yǎng)
1)外周血在無菌環(huán)境下,使用添加edta-k2的真空采血管采集,運輸保存;
2)將新鮮靜脈血與pbs緩沖液1:1稀釋,輕輕混勻待用;
3)添加4ml細胞分離液(abs930),緩慢加入靜脈血混合物8ml,靜置待用;
4)2000rpm離心20min,在此過程中升降速度降至1,避免產生細胞融合;
5)此時觀察到15ml離心管為4層,輕輕吸取第2層白色懸浮物于15ml離心管,混勻待用;
6)1500rpm離心10min,在此過程中升降速度降至1,避免產生細胞融合,棄上清;
7)添加適量t細胞無血清基礎培養(yǎng)基靜置培養(yǎng)觀察。t細胞無血清培養(yǎng)基的配置:向t細胞無血清基礎培養(yǎng)基里添加il-2(abs05543)200-500單位/ml(刺激t細胞生長與增殖),cd3/cd28磁珠(abs160019)3ug/ml(激活t細胞);
8)使用t細胞無血清培養(yǎng)基,懸浮調整至合適濃度,96孔板,每孔約加入5*105 活t細胞,100ul體積;
9)重懸類器官混合液,分別加入等量的樣至96孔板中,至總體積200ul。
3、培養(yǎng)觀察
1)d0觀察記錄類器官和t細胞狀態(tài);
2)37℃,5% co2條件下培養(yǎng),每日連續(xù)觀察;
3)d3吸出100ul培養(yǎng)上清,加入100ul新培養(yǎng)基,同時加入(處理抗體或藥物)使至終濃度100nm(如果d3已出現(xiàn)顯著差別,則記錄大視野明場形態(tài),終止實驗);
4)觀察至實驗組間差異顯著,拍照記錄大視野細胞明場形態(tài);
5)細胞上清保存用于后續(xù)檢測。
此圖為我司做得免疫共培養(yǎng)實驗,從上圖可明顯看出b藥物作用下,t細胞有明顯的殺傷效果。
今天講解就到這了,大家如有實驗問題,歡迎公眾號“愛必信生物”后臺留言哦!
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