近年來，腫瘤免疫療法在癌癥治療中非?；馃?。腫瘤免疫學治療的目的是激發(fā)或調動機體的免疫系統(tǒng)，增強腫瘤微環(huán)境抗腫瘤免疫力，從而控制和殺傷腫瘤細胞。隨著免疫治療的興起也推動了腫瘤研究的發(fā)展，但是由于人源化體系的復雜性、免疫系統(tǒng)的部分或無效重組建等問題，致使免疫腫瘤模型面臨著巨大的挑戰(zhàn)，臨床上迫切需要能夠用于個體化驗證療效的體外模型。類器官的出現(xiàn)給腫瘤免疫治療提供了新的契機，然而，現(xiàn)有的類器官中缺乏免疫細胞限制了其發(fā)展。
小愛這次給大家介紹一下基本的腫瘤類器官免疫共培養(yǎng)方法，如下：
1、類器官準備
1）提前一周，復蘇培養(yǎng)類器官至狀態(tài)良好；
2）取合適數量類器官，使用預冷pbs清洗數次，去除大部分基質膠；
3）使用培養(yǎng)基重懸類器官。
2、pbmc分離和類器官共培養(yǎng)
1）外周血在無菌環(huán)境下，使用添加edta-k2的真空采血管采集，運輸保存；
2）將新鮮靜脈血與pbs緩沖液1：1稀釋，輕輕混勻待用；
3）添加4ml細胞分離液（abs930），緩慢加入靜脈血混合物8ml，靜置待用；
4）2000rpm離心20min，在此過程中升降速度降至1，避免產生細胞融合；
5）此時觀察到15ml離心管為4層，輕輕吸取第2層白色懸浮物于15ml離心管，混勻待用；
6）1500rpm離心10min，在此過程中升降速度降至1，避免產生細胞融合，棄上清；
7）添加適量t細胞無血清基礎培養(yǎng)基靜置培養(yǎng)觀察。t細胞無血清培養(yǎng)基的配置：向t細胞無血清基礎培養(yǎng)基里添加il-2（abs05543）200-500單位/ml（刺激t細胞生長與增殖），cd3/cd28磁珠（abs160019）3ug/ml（激活t細胞）；
8）使用t細胞無血清培養(yǎng)基，懸浮調整至合適濃度，96孔板，每孔約加入5*105 活t細胞，100ul體積；
9）重懸類器官混合液，分別加入等量的樣至96孔板中，至總體積200ul。
3、培養(yǎng)觀察
1）d0觀察記錄類器官和t細胞狀態(tài)；
2）37℃，5% co2條件下培養(yǎng)，每日連續(xù)觀察；
3）d3吸出100ul培養(yǎng)上清，加入100ul新培養(yǎng)基，同時加入（處理抗體或藥物）使至終濃度100nm（如果d3已出現(xiàn)顯著差別，則記錄大視野明場形態(tài)，終止實驗）；
4）觀察至實驗組間差異顯著，拍照記錄大視野細胞明場形態(tài)；
5）細胞上清保存用于后續(xù)檢測。
此圖為我司做得免疫共培養(yǎng)實驗，從上圖可明顯看出b藥物作用下，t細胞有明顯的殺傷效果。
今天講解就到這了，大家如有實驗問題，歡迎公眾號“愛必信生物”后臺留言哦！
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