葉綠素以各種形式存在于地表水中的藻類和其他浮游植物的活細(xì)胞內(nèi)。葉綠素是負(fù)責(zé)光合作用的分子裝置中的關(guān)鍵生化成分,光合作用是利用陽光的能量產(chǎn)生維持生命的氧氣的關(guān)鍵過程。在下面的光合反應(yīng)中,二氧化碳被水還原,葉綠素幫助這種轉(zhuǎn)移。
葉綠素存在于許多有機(jī)體中,包括藻類和一些細(xì)菌。葉綠素a是光合生物中豐富的葉綠素形式,并且大部分賦予植物綠色。然而,還有其他形式的葉綠素,編碼的b,c和d,這增加了整個(gè)熒光信號。這些葉綠素,包括葉綠素a,可以存在于所有光合生物體中,但濃度不同。
葉綠素的一個(gè)重要特征是熒光。當(dāng)用特定波長的光照射時(shí),它發(fā)出更高波長(或更低能量)的光。葉綠素?zé)晒獾哪芰κ撬猩虡I(yè)熒光計(jì)的基礎(chǔ),能夠在原位測量分析物。這種類型的熒光計(jì)已經(jīng)使用了一段時(shí)間。這些儀器通過將適當(dāng)波長的光束照射到樣品中,然后測量由于熒光過程而發(fā)出的較高波長的光來誘導(dǎo)葉綠素?zé)晒?。大多?shù)葉綠素系統(tǒng)使用發(fā)光二極管(led)作為輻射光源,其峰值波長約為470nm。具有此規(guī)范的led在可見光譜的藍(lán)色區(qū)域中產(chǎn)生輻射。在這種藍(lán)光照射下,整個(gè)細(xì)胞中的葉綠素在光譜的650-7700 nm區(qū)域發(fā)射光。為了量化熒光,系統(tǒng)檢測器通常是高靈敏度的光電二極管,由限制所檢測光的光學(xué)濾波器屏蔽。該濾光片防止470 nm激發(fā)光在水中顆粒反向散射時(shí)被檢測到。沒有過濾器,渾濁(渾濁)的水似乎含有熒光的浮游植物,即使沒有浮游植物。葉綠素探針圖。
大多數(shù)商業(yè)熒光計(jì)可分為兩類:一般具有優(yōu)越的光學(xué)靈活性和能力但相對昂貴且難以在現(xiàn)場使用的臺式儀器,以及具有固定光學(xué)結(jié)構(gòu)的較便宜的現(xiàn)場型熒光計(jì),可以更容易在現(xiàn)場使用,并且通常與數(shù)據(jù)收集平臺兼容。然而,通常建議在臺式熒光計(jì)和現(xiàn)場型熒光計(jì)中使用泵,這可能導(dǎo)致需要大容量電池用于現(xiàn)場使用。這些類型的熒光計(jì)還有其他缺點(diǎn)。例如,它們只能給出葉綠素(熒光)讀數(shù),并且不能測量任何其他水質(zhì)參數(shù)。此外,輸出是在mv或熒光單位,而不是μg/ l.。
ysi*的葉綠素系統(tǒng)由概念上類似于場型熒光計(jì)的探針組成,但體積小得多,使其與ysi 6系列和exo探空儀的探針端口兼容。葉綠素傳感器的輸出通過探空儀軟件自動處理,以便提供在一般熒光單位(滿標(biāo)度%;%fs)或葉綠素的μg/l中的讀數(shù)。ysi系統(tǒng)不需要泵,允許傳感器從探測器內(nèi)部電池或顯示器/記錄器中的電池操作。此外,ysi葉綠素探針將是ysi和exo探空儀中的組件,它們還具有同時(shí)獲取多個(gè)參數(shù)的能力,而不僅僅是提供單個(gè)參數(shù)的葉綠素。
分光光度法是測定地表水葉綠素含量的經(jīng)典方法。它包括收集相當(dāng)大的水樣,過濾樣品以濃縮含葉綠素的生物,機(jī)械破壞收集的細(xì)胞,以及將葉綠素從破裂的細(xì)胞中提取到有機(jī)溶劑丙酮中。然后利用葉綠素的已知光學(xué)性質(zhì),用分光光度法(吸光度或熒光法)或hplc分析提取物。這一通用方法,詳見標(biāo)準(zhǔn)方法章節(jié)10200h.中,在多個(gè)測試和應(yīng)用中被證明是準(zhǔn)確的,是科學(xué)文獻(xiàn)中普遍接受的報(bào)告程序。熒光法也需要與分光光度法相同的提取方法,然后使用熒光計(jì)測量離散分子葉綠素?zé)晒狻H欢?,這些方法有明顯的缺點(diǎn)。它們是耗時(shí)的,并且通常需要經(jīng)驗(yàn)豐富的、的分析人員來生成始終準(zhǔn)確和可重復(fù)的結(jié)果。此外,它們不容易繼續(xù)監(jiān)測葉綠素(從而浮游植物),因?yàn)橐院侠淼臅r(shí)間間隔(例如,每小時(shí))收集樣本將極其耗時(shí)。
ysi已經(jīng)開發(fā)了用于現(xiàn)場取樣和連續(xù)監(jiān)測應(yīng)用中的葉綠素測定的光學(xué)傳感器。這些傳感器基于一種替代方法來測量葉綠素,克服了這些缺點(diǎn),盡管存在潛在的精度損失。在這個(gè)過程中,在不破壞細(xì)胞的情況下,在提取分析中原位測定葉綠素。ysi 6025葉綠素傳感器和exo 599102全藻類傳感器被設(shè)計(jì)用于這些原位應(yīng)用,并且它們的使用允許在采樣采樣或連續(xù)監(jiān)測應(yīng)用中大量收集葉綠素?cái)?shù)據(jù)。
然而重要的是要記住,現(xiàn)場分析的結(jié)果將不如經(jīng)驗(yàn)證的萃取分析程序的結(jié)果準(zhǔn)確。在用ysi探測儀和傳感器進(jìn)行葉綠素測定之前,應(yīng)仔細(xì)考慮原位方法的局限性。通過在采樣或監(jiān)測研究中結(jié)合少量樣本與ysi傳感器數(shù)據(jù)的提取分析,可以將一些不的來源小化?,F(xiàn)場研究將永遠(yuǎn)不會取代標(biāo)準(zhǔn)的程序。從易于使用的ysi葉綠素系統(tǒng)估算葉綠素濃度是為了補(bǔ)充更、但更難獲得的、來自更傳統(tǒng)的葉綠素測定方法的結(jié)果。