信帆生物：人外周血淋巴細胞分離液說明書（ficoll）的保存條件
人外周血淋巴細胞分離液說明書（ficoll）
規(guī)格：200ml
保存條件：本產(chǎn)品對光敏感，應(yīng)該室溫避光儲存，保質(zhì)期2年。無菌開封后，保存于室溫。
產(chǎn)品簡介：
本產(chǎn)品是一種用于分離人外周血淋巴細胞的無菌、低內(nèi)毒素水平的密度梯度分離液。其分離原理是根據(jù)血細胞的密度差異（紅細胞和粒細胞密度為1.090g/ml左右；淋巴細胞和單核細胞密度為1.075~1.090 g/ml；血小板為1.030~1.035 g/ml），通過離心使一定密度的細胞按相應(yīng)密度梯度分布，從而將淋巴細胞從人外周血或臍帶血中分離出來。
產(chǎn)品指標：
密度 1.077±0.001g/ml
滲透壓 290~350 mosm/kg h2o
無菌 0.1μm 濾膜過濾
操作步驟：
1. 取新鮮抗凝全血（edta、枸櫞-酸鈉或肝素抗凝均可）或者去纖維蛋白血液，用等體積的全血及組織稀釋液或者pbs稀釋全血。
2. 在離心管中加入適量分離液（當(dāng)稀釋后血液體積小于3ml時，加入3ml分離液；大于等于3ml，加入等體積分離液。但二者的總體積不能超過離心管的三分之二，否則會影響分離效果），將稀釋后的血液平鋪到分離液液面上方，注意保持兩液面界面清晰。（可以使用巴氏德吸管吸取血液，然后將血液小心的平鋪于分離液上，因為兩者的密度差異，將形成明顯的分層界面。如果樣品較多加樣時間較長，在離心之前出現(xiàn)紅細胞成團下沉屬正?，F(xiàn)象。）
3. 室溫，水平轉(zhuǎn)子500~1000g，離心20~30min（血液的體積越大所需的離心力越大，離心時間越長，最佳的分離條件需摸索，離心轉(zhuǎn)速最大不超過1200g）。
4. 離心后將出現(xiàn)明顯的分層：最上層是稀釋的血漿層，中間是透明的分離液層，血漿與分離液之間的白膜層即為淋巴細胞層，離心管底部是紅細胞與粒細胞。
5. 小心的吸取白膜層細胞到15ml潔凈的離心管中，10ml pbs或細胞洗滌液洗滌白膜層細胞。250g，離心10min。
6. 棄上清，5ml的pbs或細胞清洗液重懸細胞，250g，離心10min。
7. 重復(fù)步驟6。
8. 棄上清，細胞重懸備用。
分離純度：
使用人淋巴細胞分離液分離淋巴細胞的分離純度大于90%。
注意事項：
a)開封前顛倒混勻，本分離液為無菌產(chǎn)品，為延長分離液保存時間，請在無菌條件下啟封，避免微生物污染。。
b)分離液使用時應(yīng)始終保持室溫（18℃~25℃），如室內(nèi)溫度較低，可將分離液預(yù)熱。4℃或者是溫度較低的條件下離心，可能會導(dǎo)致白膜層中紅細胞污染加重。
c)血液樣本最好為新鮮抗凝血（采血2 h以內(nèi)），為保持淋巴細胞的活性，應(yīng)避免冷凍和冷藏。
d)稀釋血液或洗滌細胞，不可使用含ca、mg離子的緩沖液及培養(yǎng)液，其成分會導(dǎo)致血細胞凝集，大大降低細胞得率及純度。
e)部分塑料制品（如聚苯乙烯）因其帶有的靜電作用，可能會導(dǎo)致細胞掛壁，影響分離效果。
f)血液樣本的粘稠度或者是溫度差異，可能會影響分離效果，可以調(diào)節(jié)離心轉(zhuǎn)數(shù)和離心時間，摸索最佳的分離條件。
g)吸取過多的淋巴細胞層及分離液層會導(dǎo)致分離液交界處的粒細胞被吸出從而使混雜的粒細胞數(shù)量增加；吸取過多的血漿層可能會導(dǎo)致淋巴細胞中血漿蛋白及血小板污染。
h)如果要進一步對分離的細胞進行培養(yǎng)，那在收集血液和分離過程中，注意無菌操作，避免微生物污染。
i)不同動物血液在不同比重分離液中的細胞離散系數(shù)及細胞帶電不同，用戶在制定分離液時應(yīng)提供所需分離液的比重、動物種屬及被分離細胞的名稱。
信帆生物：人外周血淋巴細胞分離液說明書（ficoll）的保存條件