rna是目前發(fā)現(xiàn)細胞內(nèi)生物功能zui豐富多樣的生物大分子，同時是dna與蛋白質(zhì)信息傳遞的橋梁，因此完整rna的提取和純化是功能基因組時代的重要手段。那么你知道rna提取成功的要點有哪些嗎？讓我們一起來看看吧！
1. 組織樣本要盡可能的新鮮，避免反復凍融。
2. 提取時組織要充分研磨，組織量不宜過少，更不宜過多。
3. 加入裂解液后應給予充分的孵育時間，使樣本充分裂解。
4. 在用trizol法提取時，分層后吸取上清的原則是“寧愿少吸，不能多吸”，千萬不能提取到中間層，否則會導致嚴重的基因組dna污染。
5. 洗滌時洗滌液應充分浸潤到管壁的四周，確保洗滌che底。
6. 柱式提取法，洗滌完后除了對柱子進行空離后，還應當將吸附柱置于超凈臺內(nèi)吹風5~10 min，使有機溶劑充分揮發(fā)干。
7. 柱式法最后洗脫時候，當加入depc水后還應孵育3~5 min，或者提前將depc水加熱至60℃，可提高洗脫得率。傳統(tǒng)的trizol裂解異丙醇沉淀法最后rna是用depc水溶解沉淀，則應當給予適當溶解時間，并用槍頭不斷吹吸離心管底部。
8. 預防rnase污染，應注意以下幾個方面：
（1）經(jīng)常更換新手套。因為皮膚經(jīng)常帶有細菌，可能導致rnase污染。
（2）使用無rnase的塑料制品和槍頭，避免交叉污染。
（3）rna在trizol試劑中不會被rnase降解。但提取后繼續(xù)處理過程中應使用不含rnase的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150 ℃烘烤4h，塑料器皿可在0.5m naoh中浸泡10min，然后用水che底清洗，再滅菌，即可去除rnase
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