細胞破碎的四種方法(二)

發(fā)布時間:2024-09-27
三、化學破碎法:指利用甲醛、丙酮等有機溶劑或表面活性劑作用于細胞膜,使細胞膜的結構遭到破壞或透性發(fā)生改變 。
有些動物細胞,例如腫瘤細胞可采用十二烷基磺酸鈉(sds)、去氧膽酸鈉等細胞膜破壞。濃度一般為1mg/ml。
四、酶學破碎法 :選用合適的酶,使細胞壁遭到破壞,進而在低滲溶液中將原生質(zhì)體破碎開來。
細菌細胞壁較厚,可采用*處理效果更好。
裂解液標準配方: :50mm tris-hcl(ph8.5~9.0), 2mm edta, 100mm nacl, 0.5% triton x-100, 1mg/ml*。(*在這個ph范圍內(nèi)比較好發(fā)揮作用) 。
綜合敘述:無論用哪一種方法破碎組織細胞,都會使細胞內(nèi)蛋白質(zhì)或核酸水解酶釋放到溶液中,使大分子生物降解,導致天然物質(zhì)量的減少,加入二異丙基氟磷酸(dfp)可以抑制或減慢自溶作用;加入碘乙酸可以抑制那些活性中心需要有疏基的蛋白水解酶的活性,加入pmsf也能清除蛋白水解酶活力,但不是全部,而且應該在破碎的同時多加幾次;另外,還可通過選擇ph、溫度或離子強度等,使這些條件都要適合于目的物質(zhì)的提取。
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