cellsorter熒光激活高速自動細(xì)胞分選系統(tǒng)
-細(xì)胞揀選程序
cellsorter熒光激活高速自動細(xì)胞分選系統(tǒng)使用了玻璃微量移液器，該微量移液器由安裝在電動倒置顯微鏡物鏡上的控制臺固定。這種帶有適當(dāng)軟件的顯微鏡附件可通過計(jì)算機(jī)視覺控制自動進(jìn)行單細(xì)胞操作。微量移液器的垂直定位精度取決于物鏡的景深和顯微鏡的精細(xì)聚焦驅(qū)動。使用軟件校準(zhǔn)，微量移液器的水平定位與顯微鏡的光學(xué)分辨率和2d電動顯微鏡載物臺的精度一樣精確。
對在35毫米培養(yǎng)皿中培養(yǎng)的活的粘附哺乳動物細(xì)胞進(jìn)行了分類揀選，這些細(xì)胞要么在通過硅烷化作用制成親水性的聚二甲基硅氧烷（pdms）薄層上，要么在裸露的玻璃上。用數(shù)碼相機(jī)捕獲培養(yǎng)物的相襯和熒光顯微鏡圖像。用2d電動載物臺掃描大面積的培養(yǎng)皿。軟件可以識別相襯和熒光鑲嵌圖像中的細(xì)胞，這些圖像是從相鄰的顯微鏡區(qū)域合并而來的。
沿著行進(jìn)的salesman算法計(jì)算出的路徑，一對一地訪問選定的熒光細(xì)胞，然后通過計(jì)算機(jī)控制的微量移液器將其拾取。為避免碰撞，微量移液器在兩個(gè)細(xì)胞之間，距離表面100毫米, 通過定位拾取細(xì)胞.
使用2d電動載物臺，將下一個(gè)細(xì)胞恰好位于微量移液器孔的下方。微量移液器的上端連接到一個(gè)塑料管，該塑料管通向一個(gè)高速電磁液體閥。閥的另一個(gè)端口連接到由*控制的注射器。在分選細(xì)胞之前，將微量移液器和試管裝滿去離子水。在拾取一個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)基之前，將其放入微量移液器中，以避免細(xì)胞的滲透性休克。使用聚焦驅(qū)動器，將附著在物鏡上的微量移液管降低到表面附近，然后打開流體閥并拾取細(xì)胞。
正在工作的細(xì)胞分選微量移液器
顯示了從電動顯微鏡載物臺上放置的35 mm培養(yǎng)皿中收集40個(gè)細(xì)胞時(shí)的微量移液器。單個(gè)閥的拾取過程伴隨著液閥打開8ms的敲擊聲。
應(yīng)用了短的8 ms可用瓣膜打開脈沖，以減少抽吸體積和去除鄰近細(xì)胞的機(jī)會。柔軟的pdms涂層可確保安全接近或用微量移液器接觸表面。