單克隆抗體技術原理及基本流程：
原理：
哺乳類細胞dna合成可分為兩條途徑，①從頭(de novo)合成途徑，利用磷酸核糖焦磷酸和尿嘧啶，可被氨基蝶呤(a)阻斷；②補救(salvag-e)合成途徑，在次黃piaoling磷酸核糖轉(zhuǎn)化酶( hgprt)存在下利用次黃piaoling(h)和胸腺嘧啶(t)。
單克隆抗體技術的流程為：脾細胞和骨髓瘤細胞在聚乙二醇(peg)作用下發(fā)生細胞融合；加入hat選擇培養(yǎng)基(含h、a和t)后，未融合的骨髓瘤細胞因其從頭合成途徑被氨基蝶呤阻斷，而又缺乏hgprt不能利用補救途徑合成dna，從而死亡；未融合的脾細胞難以在體外培養(yǎng)而死亡；融合細胞因從脾細胞獲得hgprt，故可在hat選擇培養(yǎng)基中存活和增殖。
基本流程：
一、動物免疫
(1) 抗原制備。
(2) 免疫動物的選擇。
(3) 免疫程序的確定。
二、細胞融合
首先制備細胞培養(yǎng)基、 氨基喋呤（a）貯存液、次黃piaoling和胸腺嘧啶核苷（ht）貯存液等各種細胞生長所需的營養(yǎng)物質(zhì)。然后制備髓瘤細胞和脾淋巴細胞，之后進行細胞融合。在細胞融合后選擇性培養(yǎng)過程中，由于大量骨髓瘤細胞和脾細胞相繼死亡，此時單個或少數(shù)分散的雜交瘤細胞多半不易存活，通常必須加入其他活細胞使之繁殖，這 種被加入的活細胞稱為飼養(yǎng)細胞。飼養(yǎng)細胞促進其他細胞增殖的機制尚不明了，一般認為它們可能釋放非種屬特異性的生長刺激因子，為雜交瘤細胞提供必要的生長 條件；也可能是為了滿足新生雜交瘤細胞對細胞密度的依賴性。
三、細胞篩選
雜交瘤細胞在融合后2周左右即可篩選，即把分泌所需抗體的雜交瘤孔從眾多的孔中選出來，通常也稱為抗體檢測?？贵w檢測的方法很多，通常根據(jù)所研究的抗原和 實驗室的條件而定。但作為雜交瘤篩選的抗體檢測方法必須具有快速、準備、簡便，便于一次處理大量樣品等特點。因為往往有幾百個樣品需要在短短幾個小時就報 告結果，以便決定雜交瘤細胞的取舍。所以選用抗體檢測方法的原則是快速、敏感、特異、可靠、花費小和節(jié)省人力。一般說來，在融合之前就必須建立好抗體檢測 方法，并克服可能存在的問題。另一個重要問題是抗體檢測方法所需要的“動力學范圍”，即檢出背景以上的最qiang與最弱信號之比，依所用的檢測抗原是否純凈而 定。如雜交瘤抗體是針對純化的蛋白質(zhì)抗原的，抗原參與反應，一個陽性/陰性判別系統(tǒng)就夠了。另一方面，如果雜交瘤抗體是針對細胞表面微量的蛋白 抗原，檢測系統(tǒng)可能需要能測出微弱信號，則動力學范圍至少應為10：1，最hao為100：1。另外，檢測方法的選擇還受所需雜交瘤抗體的類型和預定的用途的 影響。結合補體的抗體可以用基于細胞毒性反應的檢測方法來選出。如需結合a蛋白的雜交瘤抗體，就要用結合蛋白a的檢測方法。
四、克隆化
從原始孔中得到的陽性雜交瘤細胞，可能來源于二個或多個雜交瘤細胞，因此它們所分泌的抗體是不同質(zhì)的。為了得到wanquan同質(zhì)的單克隆抗體，必須對雜交瘤細胞進 行克隆化。另一方面，雜交瘤細胞培養(yǎng)的初期是不穩(wěn)定的，有的細胞丟失部分染色體，可能喪失產(chǎn)生抗體的能力。為了除去這部分已不再分泌抗體的細胞，得到分泌 抗體穩(wěn)定的單克隆雜交瘤細胞系（又稱亞克?。?，也需要克隆化。另外，長期液氮凍存的雜交瘤細胞，復蘇后其分泌抗體的功能仍有可能丟失，因此也應作克隆化， 以檢測抗體分泌情況。通常在得到針對預定抗原的雜交瘤以后需連續(xù)進行2-3次克隆化，有時還需進行多次。所謂克隆化是指使單個細胞無性繁殖而獲得該細胞團 體的整個培養(yǎng)過程?？寺』姆椒ê芏?，如有限稀釋法、軟瓊脂法、單細胞顯微操作法、單克隆細胞集團顯微操作法和熒光激活細胞分類儀（facs）分離法。
五、凍存與復蘇
(1) 雜交瘤細胞的凍存。
(2)雜交瘤細胞的復蘇。
六、鑒定單抗特性
(1) 單克隆性的確定 包括雜交瘤細胞的染色體分析、單抗免疫球蛋白重鏈和輕鏈類型的鑒定和單抗純度鑒定等。
(2)單抗理化特性的鑒定。從實用意義上說，單抗對溫度和ph變化的敏感性以及單抗的親合力都是理化特性鑒定的主要項目，它們可為單抗的使用和保存提供重要依據(jù)。
(3)單抗與相應抗原的反應性測定。單抗與相應抗原的反應性決定于它所識別的抗原表位，確定單抗針對的表位在抗原結構上的位置，是單抗特性鑒定的關鍵環(huán)節(jié)，同時，進一步分析這類表位的差別， 可正確評價單抗的特異性和交叉反應性。
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