液相色譜儀(hplc)檢測(cè)飼料中l(wèi)-肉堿方案
旋肉堿（l-肉堿）又稱肉毒堿，是一種水溶性氨基酸，由賴氨酸衍生而來(lái)。分子結(jié)構(gòu)為l-γ-*胺β-羥丁酸，分子式為c7h16no3，分子量為161.2。它是b族維生素類似物，曾被稱為維生素bt。其分子結(jié)構(gòu)中含有一個(gè)可供脂肪酸脂化的羥基，其飽和鍵和極性官能團(tuán)有良好的水溶性和吸濕性，200℃以上它仍穩(wěn)定存在，可在ph3~6的溶液中放置一年以上而不變壞。1998年我國(guó)衛(wèi)生部將l-肉堿批準(zhǔn)為食品添加劑，列入營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑類。
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以下是飼料中l(wèi)-肉堿的詳細(xì)檢測(cè)方法。
1 儀器與試劑
1.1 儀器
液相色譜儀
液相色譜柱 c18250mm×4.6mm×5μm
實(shí)驗(yàn)室常用儀器設(shè)備
超聲波水浴
分析天平（感量0.001g）
0.45μm水性濾膜
1.2 試劑
異丙醇，色譜純。
甲醇，色譜純。
乙腈，色譜純。
*。
磷酸二氫鉀。
三乙醇胺。
檸檬酸。
氧化銀。
肉堿衍生劑。
2 測(cè)定原理
樣品經(jīng)加乙醇超聲提取后，然后加入肉堿衍生劑，將衍生物注入液相色譜反相柱上進(jìn)行分離，用紫外檢測(cè)器在210nm波長(zhǎng)處定量測(cè)定。
3 試樣溶液的制備
稱取5g試樣于100ml燒杯中，加入30ml無(wú)水乙醇，溶解并轉(zhuǎn)移至100ml容量瓶中，先后用10ml無(wú)水乙醇分3次洗滌燒杯，樣液轉(zhuǎn)移至100ml容量瓶中，超聲提取10min后用無(wú)水乙醇定容至刻度，混勻后于4000r/min離心5min。取上清液2ml，加入肉堿衍生劑0.25ml（衍生劑配制方法：40 mg p-苯酰溴溶解于1.0 ml乙腈，加入40% 氫氧化四丁基銨50 µl），混合后置于60℃恒溫水溫箱120 min，吸取20 µl進(jìn)樣分析。
4 色譜條件
色譜柱：c18柱 250mm×4.6mm×5μm；
流動(dòng)相：甲醇：磷酸鹽=5:95
流速：1.0ml/min；
溫度：室溫；
進(jìn)樣量：20μl；
檢測(cè)波長(zhǎng)：210nm。
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