shp-77人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞介紹
shp-77保留了sclc的重要特征，具有穩(wěn)定的生物化學(xué)特性，可以連續(xù)培養(yǎng)。該細(xì)胞系是小細(xì)胞肺癌中一種不常見(jiàn)的未分化大細(xì)胞突變體。它雖然具有突變體的形態(tài)，但保持了經(jīng)典sclc的生化特性。電子顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)存在腺體形成和胞漿內(nèi)板層體(intracytoplasmic lamellar bodies)。這些細(xì)胞表達(dá)神經(jīng)內(nèi)分泌標(biāo)記物l-多巴脫羧酶和致密核心分泌顆粒(dense core secretory granules)。
shp-77可用做檢測(cè)51cr和111in釋放對(duì)體外細(xì)胞及裸鼠體內(nèi)毒性的靶標(biāo)，用于評(píng)估肺癌患者的細(xì)胞和血清的免疫反應(yīng)水平。該細(xì)胞可用于評(píng)估接受放射或化學(xué)療法治療的sclc患者的免疫狀況。經(jīng)本庫(kù)str檢測(cè)無(wú)誤。
str鑒定結(jié)果為：amelogenin:x,x；csf1po:10,11；d13s317:8,8；d16s539:11,11；d5s818:12,12；d7s820:11,11；th01:7,7；tpox:9,11；vwa:16,16。
細(xì)胞特性
1）來(lái)源：54歲男性肺;小細(xì)胞肺癌
2）形態(tài)：懸浮和松散貼壁
3）含量：>1x106細(xì)胞數(shù)
4）規(guī)格：t25瓶或者1ml凍存管包裝
5）用途：僅供科研使用。
運(yùn)輸和保存
干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
（1）1ml凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。
（2）t25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
細(xì)胞接收后的處理
1）收到細(xì)胞后，75%酒精消毒瓶壁將t25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2）請(qǐng)?jiān)?或5x顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3）半貼細(xì)胞和貼壁不牢（懸?。┘?xì)胞：t25瓶置于37℃培養(yǎng)箱中約2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的情況，若細(xì)胞密度在60%以下，客戶需收集t25瓶中的懸浮細(xì)胞離心后用完quan培養(yǎng)基重懸后打回到原培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，若細(xì)胞生長(zhǎng)70%-90%對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代，傳代時(shí)需要收集培養(yǎng)基中懸浮的細(xì)胞離心后回收。
4）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備rpmi-1640培養(yǎng)基87%
優(yōu)質(zhì)胎牛血清10%
glutamax-1谷氨酰sn1%
sodium pyruvate丙酮酸鈉1%
p/s青霉su-鏈霉su1%
注意:該細(xì)胞參考傳代周期：4-6天,參考換液頻率：每2-3天換1次液,傳代時(shí)可以輕輕拍打細(xì)胞培養(yǎng)瓶側(cè)面十余次，將懸浮的細(xì)胞進(jìn)行收集離心，以40萬(wàn)~50萬(wàn)/ml的密度重懸傳代。輕輕拍打后顯微鏡下觀察仍貼壁未懸浮的細(xì)胞量多的話可以繼續(xù)拍打重復(fù)收集，細(xì)胞量很少的則丟棄，不收集傳代。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%dmso，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二．細(xì)胞處理：
1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：
將含有1ml細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6ml完quan培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000rpm條件下離心3-5min，棄去上清液，完quan培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完quan培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過(guò)夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)70%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
該細(xì)胞為懸浮和輕微的貼壁細(xì)胞，傳代可以參考以下方法：
1.收集：將培養(yǎng)瓶中的懸浮的細(xì)胞收集到離心管中。用不含鈣、鎂離子的pbs潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。由于細(xì)胞貼壁不牢pbs潤(rùn)洗后細(xì)胞會(huì)脫落所以pbs也要回收到離心管中。
2.加入0.25％（w/v）胰蛋白mei-0.53 mm edta于培養(yǎng)瓶中（t25瓶1-2ml，t75瓶2-3ml）置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%fbs的培養(yǎng)基來(lái)終止消化。
3.將收集到的懸浮細(xì)胞、pbs清洗液中的細(xì)胞和消化下來(lái)的貼壁細(xì)胞以1000rpml離心5min，棄去上清，補(bǔ)加1-2ml培養(yǎng)液后重懸混勻后將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新t25瓶中，添加6-8ml按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的完quan培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3）細(xì)胞凍存:收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。
下面t25瓶為例；
1.細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過(guò)程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，來(lái)決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml.
2.1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞，按每1ml凍存液含1×106~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱(chēng)、代數(shù)、日期等信息。
將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過(guò)夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。