內(nèi)質(zhì)網(wǎng)α-甘露糖苷酶1抗體抗體分子標(biāo)記技術(shù)：
（一）原理
當(dāng)應(yīng)用化學(xué)氧化法時(shí)(nai)遇強(qiáng)氧化劑,離子被氧化為分子,所生成的自由分子可與某些基團(tuán)進(jìn)行鹵化反應(yīng)。蛋白質(zhì)分子可進(jìn)行鹵化反應(yīng)的基團(tuán)主要為殘基,殘基也可能進(jìn)行化。在應(yīng)用胺t( chloramine t)法的實(shí)驗(yàn)中,所用的氧化劑(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)強(qiáng)揮發(fā)性的有機(jī)溶劑中。該溶劑加入試管后,先讓其揮發(fā)(即讓氧化劑將試管包被),然后把na125i和蛋白質(zhì)液加入包被好的試管中,反應(yīng)完成即將混合液移入他管終止反應(yīng)。
（二）準(zhǔn)備
1.試劑
經(jīng)親和層析純化的多克隆抗體或單克隆抗體；0.5mol/l磷酸鈉緩沖液,ph7.5；無載體的na125i3.7gbq/ml(100mci/ml)的naoh液；100g/l三醋酸；70%乙醇；新鮮制備的含2mg/m1絡(luò)胺t的0.5mol/l磷酸鈉緩沖液(ph7.5）；胺t反應(yīng)終止緩沖液；
（三）操作要點(diǎn)
1.用胺t法進(jìn)行化,也可在大約ph7.0的緩沖液中進(jìn)行；
2.如果氧化反應(yīng)損傷蛋白質(zhì)，可將抗體與異硫酸熒光素(fitc)偶聯(lián))胺t量減少到0.02mg/m，并將偏重亞硫酸液的濃度降到0.024mg/ml；
3. iodogen-包被的試管可在干燥器中,于室溫下保存多年；
4.1251標(biāo)記的抗體,在制備后六周內(nèi)均可使用(1251的半衰期為59.6天）；
5.要注意保證所用的na1251是新鮮的,陳舊制劑的比活性低；
6.碘化偶爾會(huì)對(duì)抗原的抗體結(jié)合位點(diǎn)有干擾,因此降低其結(jié)合能力,但這種情況很少見。
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