碘化丙啶（pi）兼容于各種細(xì)胞標(biāo)記技術(shù)
產(chǎn)品描述：科研試劑，廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)，藥理學(xué)等科研方面，嚴(yán)禁用于人體。核酸熒光染色劑。碘化丙啶（propidium iodide，pi）是一種常用的細(xì)胞核熒光染料，作為一種溴化乙錠（eb）的類似物，能夠嵌入堿基之間實(shí)現(xiàn)與dna結(jié)合。這種結(jié)合沒有或者幾乎無(wú)序列傾向性，大約每4-5個(gè)dna堿基對(duì)結(jié)合一個(gè)染料。pi也能與rna結(jié)合，需要用核酸酶處理來區(qū)分dna和rna染色。水溶液中pi的最大激發(fā)/發(fā)射波長(zhǎng)是493/636nm。一旦與核酸結(jié)合，熒光信號(hào)明顯增強(qiáng)20-30倍，最大激發(fā)波長(zhǎng)向紅色波段遷移~30-40nm，最大發(fā)射波長(zhǎng)向藍(lán)色波段遷移~15nm，從而使其最大激發(fā)/發(fā)射波長(zhǎng)變?yōu)?35/617nm。pi的摩爾吸光系數(shù)相對(duì)比較低，但是其具有足夠大的斯托克司頻移來同時(shí)檢測(cè)核酸dna和熒光標(biāo)記抗體，只需要使恰當(dāng)?shù)臑V片。pi適用于熒光顯微鏡，共聚焦顯微鏡，流式細(xì)胞儀以及熒光計(jì)分析。pi不能穿透細(xì)胞膜而被排斥在活細(xì)胞外，但是可以穿過破損的細(xì)胞膜而對(duì)核染色。利用這一特性，通常與calcein-am、hoechst 33258或 hoechst 33342等活細(xì)胞熒光探針一起使用，同時(shí)對(duì)活細(xì)胞和死細(xì)胞染色和鑒定，用于細(xì)胞凋亡相關(guān)的研究。也可以用作多重?zé)晒馊旧膹?fù)染劑，兼容于各種細(xì)胞標(biāo)記技術(shù)，包括直接或者間接的熒光抗體檢測(cè)，mrna原位雜交，細(xì)胞結(jié)構(gòu)特異性的熒光探針檢測(cè)法以及組織染色。pi的單獨(dú)染色也可以進(jìn)行細(xì)胞周期的檢測(cè)。
pi不能通過活細(xì)胞膜，但卻能穿過破損的細(xì)胞膜而對(duì)核染色，常被用來與calcein-am，hoechst 33258/33342或fda等熒光化合物一起使用，同時(shí)對(duì)活細(xì)胞和死細(xì)胞進(jìn)行染色和鑒定，用于細(xì)胞凋亡相關(guān)研究。pi的單獨(dú)染色可以進(jìn)行細(xì)胞周期的檢測(cè)。pi適用于熒光顯微鏡，激光共聚焦顯微鏡，流式細(xì)胞儀及熒光分析儀。
使用方法：
1. 儲(chǔ)備液配制：將碘化丙啶粉末充分溶解于去離子水中配制成1mg/ml（1.5mm）溶液，于+4℃避光保存，可穩(wěn)定保存6個(gè)月以上。
2. 使用方法：
2.1貼壁細(xì)胞復(fù)染步驟（熒光顯微鏡檢測(cè)）
1）樣本準(zhǔn)備：根據(jù)自身樣本選擇合適的步驟固定細(xì)胞。pi染色一般在其它染色完成后再進(jìn)行。pi復(fù)染要求細(xì)胞經(jīng)透化處理。
2）rnase酶處理：若樣本使用多聚甲醛，甲醛或者戊二醛固定，則需要進(jìn)行rnase處理。若樣本用甲醇/醋酸或者丙酮固定，通常不需要此步操作。
a， 于2×ssc (0.3 m nacl, 0.03 m sodium citrate, ph 7.0)溶液平衡樣本；
b， 將本品置于含有100 µg/ml dnase-free rnase的2×ssc溶液中37°c孵育20min；
c， 用2×ssc溶液清洗樣本3次，每次1min。
3）復(fù)染：
a，于2×ssc (0.3 m nacl, 0.03 m sodium citrate, ph 7.0)溶液平衡樣本；
b，直接用2x ssc稀釋1mg/ml（1.5 mm）pi儲(chǔ)存液 1:3000，得到500 nm的pi工作液。通常添加300µl染液足夠用于一個(gè)蓋玻片細(xì)胞制片。染色1-5min。
c，2×ssc清洗幾次，流盡多余的緩沖液后，加入抗淬滅劑封片。
d，選擇熒光顯微鏡的合適濾片進(jìn)行觀察。
關(guān)鍵詞：熒光顯微鏡 共聚焦顯微鏡 流式細(xì)胞儀 顯微鏡 熒光分析儀