土壤全磷測(cè)定方法之一——hclo4—h2so4法
5.2.2.1方法原理用高氯酸分解樣品，因?yàn)樗仁且环N強(qiáng)酸，又是一種強(qiáng)氧化劑，能氧化有機(jī)質(zhì)，分解礦物質(zhì)，而且高氯酸的脫水作用很強(qiáng)，有助于膠狀硅的脫水，并能與fe3+絡(luò)合，在灰的比色測(cè)定中抑制了硅和鐵的干擾。硫酸的存在提高消化液的溫度，同時(shí)防止消化過程中溶液蒸干，以利消化作用的順利進(jìn)行。本法用于一般土壤樣品分解率達(dá)97%～98%，但對(duì)紅壤性土壤樣品分解率只有95%左右。溶液中磷的測(cè)定采用鉬銻抗比色法（其原理見5.2.1.2）
5.2.2.2主要儀器721型分光光度計(jì)；lnk-872型紅外消化爐。
5.2.2.3試劑
（1）濃硫酸（h2so4，ρ≈1.84g·cm-3，分析純）。
（2）高氯酸[co（hclo4）≈70%～72%，分析純]。
（3）2，6-二硝基酚或2，4-二硝基酚指示劑溶液。溶解二硝基酚0.25g于100ml水中。此指示劑的變色點(diǎn)約為ph3，酸性時(shí)無色，堿性時(shí)呈黃色。
（4）4mol·l-1氫氧化鈉溶液，。溶解naoh16g于100ml水中。
（5）2mol·l-1（1/2h2so4）溶液，吸取濃硫酸6ml，緩緩加入80ml水中，邊加邊攪動(dòng)，冷卻后加水至100ml。
（6）鉬銻抗試劑。a.5g·l-1酒石酸氧銻鉀溶液：取酒石酸氧銻鉀[k(sbo)c4h4o6]0.5g，溶解于100ml水中。b.鉬酸銨—硫酸溶液：稱取鉬酸銨[(nh4)6mo7o24·4h2o]10g，溶于450ml水中，緩慢地加入153ml濃h2so4，邊加邊攪。再將上述a溶液加入到b溶液中，*后加水至1l。充分搖勻，貯于棕色瓶中，此為鉬銻混合液。
臨用前（當(dāng)天），稱取**抗壞血酸（c6h8o5，化學(xué)純）1.5g，溶于100ml鉬銻混合液中，混勻，此即鉬銻抗試劑。有效期24小時(shí)，如藏冰箱中則有效期較長(zhǎng)。此試劑中h2so4為5.5mol·l-1（h+），鉬酸銨為10g·l-1，酒石酸氧銻鉀為0.5g·l-1，抗壞血酸為1.5g·l-1。
（7）磷標(biāo)準(zhǔn)溶液。準(zhǔn)確稱取在105℃烘箱中烘干的kh2po4（分析純）0.2195g，溶解在400ml水中，加濃h2so45ml（加h2so4防長(zhǎng)霉菌，可使溶液長(zhǎng)期保存），轉(zhuǎn)入1l容量瓶中，加水至刻度。此溶液為50μg·ml-1p標(biāo)準(zhǔn)溶液。吸取上述磷標(biāo)準(zhǔn)溶液25ml，即為5g·ml-1p標(biāo)準(zhǔn)溶液（此溶液不宜久存）。
5.2.2.4操作步驟
（1）待測(cè)液的制備準(zhǔn)確稱取通過100目篩子的風(fēng)干土樣0.5000～1.0000g（注1），置于50ml開氏瓶（或100ml消化管）中，以少量水濕潤(rùn)后，加濃h2so48ml，搖勻后，再加70%～72%hclo410滴，搖勻，瓶口上加一個(gè)小漏斗，置于電滬上加熱消煮（至溶液開始轉(zhuǎn)白后繼續(xù)消煮）20min。全部消煮時(shí)間為40～60min。在樣品分解的同時(shí)做一個(gè)空白試驗(yàn)，即所用試劑同上，但不加土樣，同樣消煮得空白消煮液。
將冷卻后的消煮液倒入100ml容量瓶中（容量瓶中事先盛水30～40ml），用水沖洗開氏瓶（用水應(yīng)根據(jù)少量多次的原則），輕輕搖動(dòng)容量瓶，待*冷卻后，加水定容。靜置過夜，次日小心地吸取上層澄清液進(jìn)行磷的測(cè)定；或者用干的定量濾紙過濾，將濾液接收在100ml干燥的三角瓶中待測(cè)定。
（2）測(cè)定吸取澄清液或?yàn)V液5ml[（對(duì)含p，0.56g·kg-1以下的樣品可吸取10ml），以含磷（p）在20～30μg為*好]注入50ml容量瓶中，用水沖稀至30ml，加二硝基酚指示劑2滴，滴加4mol·l-1naoh溶液直至溶液變?yōu)辄S色，再加2mol·l-1（1/2h2so4）溶液1滴，使溶液的黃色剛剛褪去（這里不用nh4oh調(diào)節(jié)酸度，因消煮液酸濃度贈(zèng)大，需要較多堿去中和，而nh4oh濃度如超過10g·l-1就會(huì)使鉬藍(lán)色迅速消退）。然后加鉬銻抗試劑5ml，再加水定容50ml，搖勻。30min后，用880nm或700nm波長(zhǎng)進(jìn)行比色（注2），以空白液的透光率為100（或吸光度為0），讀出測(cè)定液的透光度或吸收值。
（3）標(biāo)準(zhǔn)曲線準(zhǔn)確吸取5μg·ml-1，p標(biāo)準(zhǔn)溶液0、1、2、4、6、8、10ml。分別放入50ml容量瓶中，加水至約30ml，再加空白試驗(yàn)定容后的消煮液5ml，調(diào)節(jié)溶液ph為3，然后加鉬銻抗試劑5ml，*后用水定容至50ml。30min后開始進(jìn)行比色。各瓶比色液磷的濃度分別為0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0μg·ml-1p。
5.2.2.5結(jié)果計(jì)算從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得待測(cè)液的磷含量后，可按下式進(jìn)行計(jì)算：
土壤全磷（p）量（g·kg-1）=
式中：ρ——待測(cè)液中磷的質(zhì)量濃度（g·kg-1）；
v——樣品制備溶液的ml數(shù)；
m——烘干土質(zhì)量（g）；
v1——吸取濾液ml數(shù)；
v2——顯色的溶液體積（ml）；
10-3——將μg數(shù)換算成的g·kg-1乘數(shù)。
注釋：
注1.*后顯色溶液中含磷量在20～30μg為*好?？刂屏椎臐舛戎饕ㄟ^稱取量或*后顯色時(shí)吸取待測(cè)液的毫升數(shù)。
注2.本法鉬藍(lán)顯色液比色時(shí)用880nm波長(zhǎng)比700nm更靈敏，一般分光光度計(jì)為721型，只能選700nm波長(zhǎng)。
5.2.3土壤全磷測(cè)定方法之二——naoh熔融—鉬銻抗比色法
土壤硅酸鹽的溶解度決定于硅和金屬元素的比例以及金屬元素的堿度。硅和金屬元素的比例愈小，金屬元素的堿性愈強(qiáng)，則硅酸鹽的溶解度愈大，用naoh熔化土樣，即增加樣品中堿金屬的比例，保證熔解物能為酸所分解，直至能溶解于水中。溶液中磷的測(cè)定用鉬銻抗法（其原理見5.2.1.2）。
下面引用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)法gb8937-1988《土壤全磷測(cè)定法》氫氧化鈉熔融—鉬銻抗比色法。
5.2.3.1適用范圍本標(biāo)準(zhǔn)適用于測(cè)定各類土壤全磷含量。
5.2.3.2方法原理土壤樣品與氫氧化鈉熔融，使土壤中含磷礦物及有機(jī)磷化合物全部轉(zhuǎn)化為可溶性的正磷酸鹽，用水和稀硫酸溶解熔塊，在規(guī)定條件下樣品溶液與鉬銻抗顯色劑反應(yīng)，生成磷鉬藍(lán)，用分光光度法定量測(cè)定。
5.2.3.3儀器設(shè)備
（1）土壤樣品粉碎機(jī)。
（2）土壤篩，孔徑1mm和0.149mm。
（3）分析天平，感量為0.0001g。
（4）鎳（或銀）坩堝，容量≥30ml。
（5）高溫電爐，溫度可調(diào)（0～100℃）。
（6）分光光度計(jì)，要求包括700nm波長(zhǎng)。
（7）容量瓶50、100、1000ml。
（8）移液管5、10、15、20ml。
（9）漏斗直徑7cm。
（10）燒杯150、100ml。
（11）瑪瑙研缽。
5.2.3.4試劑
所有試劑，除注明外，皆為分析純，水均指蒸餾水或去離子水。
（1）氫氧化鈉（gb620）
（2）無水乙醇（gb678）
（3）100g·l-1，碳酸鈉溶液：10g*（gb639）溶于水后，稀釋至100ml，搖勻。
（4）50ml·l-1硫酸溶液：吸取5ml濃硫酸（gb625，95.0%～98.0%，比重1.84）緩緩加入90ml水中，冷卻后加水至100ml。
（5）3mol·l-1h2so4溶液：量取160ml濃硫酸緩緩加入到盛有800ml左右水的大燒杯中，不斷攪拌，冷卻后，再加水至1000ml。
（6）二硝基酚指示劑：稱取0.2g2，6-二硝基酚溶于100ml水中。
（7）5g·l-1酒石酸銻鉀溶液：稱取化學(xué)純酒石酸銻鉀0.5g溶于100ml水中。
（8）硫酸鉬銻貯備液：量取126ml濃硫酸，緩緩加入到400ml水中，不斷攪拌，冷卻。另稱取經(jīng)磨細(xì)的鉬酸銨（gb657）10g溶于溫度約60℃300ml水中，冷卻。然后將硫酸溶液緩緩倒入鉬酸銨溶液中，再加入5g·l-1酒石酸銻鉀溶液100ml，冷卻后，加水稀釋至1000ml，搖勻，貯于棕色試劑瓶中，此貯備液含10g·l-1鉬酸銨，2.25mol·l-1h2so4。
（9）鉬銻抗顯色劑：稱取1.5g抗壞血酸（**，旋光度+21～22o）溶于100ml鉬銻貯備液中。此溶液有效期不長(zhǎng)，宜用時(shí)現(xiàn)配。
（10）磷標(biāo)準(zhǔn)貯備液：準(zhǔn)確稱取經(jīng)105℃下烘干2h的磷酸二氫鉀（gb1274，優(yōu)級(jí)純）0.4390g，用水溶解后，加入5ml濃硫酸，然后加水定容至1000ml，該溶液含磷100mg·l-1，放入冰箱可供長(zhǎng)期使用。
（11）5mg·l-1磷（p）標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確吸取5ml磷貯備液，放入100ml容量瓶中，加水定容。該溶液用時(shí)現(xiàn)配。
（12）無磷定量濾紙。
5.2.3.5土壤樣品制備取通過1mm孔徑篩的風(fēng)干土樣在牛皮紙上鋪成薄層，劃分成許多小方格。用小勺在每個(gè)方格中提出等量土樣（總量不少于20g）于瑪瑙研缽中進(jìn)一步研磨使其全部通過0.149mm孔徑篩?；靹蚝笱b入磨口瓶中備用。
5.2.3.6操作步驟
（1）熔樣。準(zhǔn)確稱取風(fēng)干樣品0.25g，**到0.0001g，小心放入鎳（或銀）坩堝底部，切勿粘在壁上，加入無水乙醇3～4滴，濕潤(rùn)樣品，在樣品上平鋪2g氫氧化鈉，將坩堝（處理大批樣品時(shí)，暫放入大干燥器中以防吸潮）放入高溫電爐，升溫。當(dāng)溫度升至400℃左右時(shí)，切斷電源，暫停15min。然后繼續(xù)升溫至720℃，并保持15min，取出冷卻，加入約80℃的水10ml和用水多次洗坩堝，洗滌液也一并移入該容量瓶，冷卻，定容，用無磷定量濾紙過濾或離心澄清，同時(shí)做空白試驗(yàn)。
（2）繪制校準(zhǔn)曲線。分別準(zhǔn)確吸取5mg·l-1磷（p）標(biāo)準(zhǔn)溶液0、2、4、6、8、10ml于50ml容量瓶中，同時(shí)加入與顯色測(cè)定所用的樣品溶液等體積的空白溶液二硝基酚指示劑2～3滴，并用100g·l-1碳酸鈉溶液或50ml·l-1硫酸溶液調(diào)節(jié)溶液至剛呈微黃色，準(zhǔn)確加入鉬銻抗顯色劑5ml，搖勻，加水定容，即得含磷（p）量分別為0.0、0.2、0.4、0.8、1.0mg·l-1的標(biāo)準(zhǔn)溶液系列。搖勻，于15℃以上溫度放置30min后，在波長(zhǎng)700nm處，測(cè)定其吸光度，在方格坐標(biāo)紙上以吸光度為縱坐標(biāo)，磷濃度（mg·l-1）為橫坐標(biāo)，繪制校準(zhǔn)曲線。
（3）樣品溶液中磷的定量。
①顯色：準(zhǔn)確吸取待測(cè)樣品溶液2～10ml（含磷0.04～1.0µg）于50ml容量瓶中，用水稀釋至總體積約3/5處，加入二硝基酚指示劑2～3滴，并用100g·l-1碳酸鈉溶液或50ml·l-1硫酸溶液調(diào)節(jié)溶液至剛呈微黃色，準(zhǔn)確加入5ml鉬銻抗顯色劑，搖勻，加水定容，室溫15℃以上，放置30min。
②比色：顯色的樣品溶液在分光光度計(jì)上，用700nm、1cm光徑比色皿，以空白試驗(yàn)為參比液調(diào)節(jié)儀器零點(diǎn)，進(jìn)行比色測(cè)定，讀取吸光度，從校準(zhǔn)曲線上查得相應(yīng)的含磷量。
5.2.3.7結(jié)果計(jì)算
土壤全磷（p）含量（g·kg-1）=
式中：ρ——從校準(zhǔn)曲線上查得待測(cè)樣品溶液中磷的質(zhì)量濃度（g·kg-1）；
m——稱樣質(zhì)量（g）；
v1——樣品熔后的定容體積（ml）；
v2——顯色時(shí)溶液定容的體積（ml）；
10-3——將mg·l-1濃度單位換算成的kg質(zhì)量的換算因素；
100/（100-h）——將風(fēng)干土變換為烘干土的轉(zhuǎn)換因數(shù)；
h——風(fēng)干土中水分含量百分?jǐn)?shù)。
用兩平行測(cè)定的結(jié)果的算術(shù)平均值表示，小數(shù)點(diǎn)后保留三位。
允許差：平行測(cè)定結(jié)果的優(yōu)良相差，不得超過0.05g·kg-1。
附加說明：
本標(biāo)準(zhǔn)由國(guó)內(nèi)農(nóng)業(yè)分析標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口。
本標(biāo)準(zhǔn)由中國(guó)農(nóng)業(yè)*分析測(cè)試中心負(fù)責(zé)起草。
本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人肖國(guó)壯、張輝、蘇方康、**。
[編者注]為了全書統(tǒng)一，文中不符合國(guó)家法定計(jì)量單位的地方，加以修改，特此說明。