中華人民共和國出入境檢驗檢疫行業(yè)標準
sn/t 0525-2012
代替sn 0525-1996
出口水果、蔬菜中福美雙殘留量檢測方法
determination of thiram residue in fruit and vegetable for export
前言
本標準按照gb/t1.1-2009給出的規(guī)則起草。
本標準代替sn0525-1996《出口水果、蔬菜中福美雙殘留量檢驗方法》。
本標準由國家認證認可監(jiān)督管理委員會提出并歸口。
本標準起草單位：中華人民共和國深圳出入境檢驗檢疫局、中華人民共和國廈門出入境檢驗檢疫局。
本標準主要起草人：林黎、陳波、侯樂錫、謝麗琪、周昱、岳振峰、靳保輝。
本標準所代替標準的歷次版本發(fā)布情況為：
sn 0525-1996。
1范圍
本標準規(guī)定了出口水果、蔬菜中福美雙殘留量的液相色譜和液相色譜質(zhì)譜/質(zhì)譜檢測方法。
本標準適用于蘋果、梨、香蕉、西瓜、芹菜、茄子和白菜中福美雙殘留量的測定。
2規(guī)范性引用文件
下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可（ke）少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。
gb/t 6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法
3原理
樣品經(jīng)乙腈提取，濃縮后用液相色譜儀和液質(zhì)聯(lián)用儀進行測定，外標法定量。
4試劑和材料
除另有說明外，所有試劑均為分析純，水為gb/t 6682規(guī)定的一級水。
4.1乙腈：hplc級。
4.2甲醇：hplc級。
4.3甲醇-水（30+70，體積比）：取30 ml甲醇（4.2）和70 ml水混合均均。
4.4甲醇-水（50+50，體積比）：取50ml甲醇（4.2）和50ml水混合均勻。
4.5甲酸：hplc級。
4.6醋酸銨：hplc級。
4.7 0.05%甲酸的甲醇溶液：在200ml甲醇中加入0.1ml甲酸。
4.8 0.05%甲酸的甲醇溶液-水（50+50，體積比）：取50 ml 0.05%甲酸的甲醇溶液（4.7）和50 ml水混合均勻。
4.9醋酸銨溶液（0.05%甲酸）：5 mmol/l。準確稱取0.3854 g醋酸銨（4.6），用水溶解，加0.5 ml甲酸（4.5），用水定容到1 000 ml。
4.10無水硫酸鈉：分析純。500℃灼燒4 h，置于干燥器中備用。
4.11福美雙標準物質(zhì)：thiram，純度大于99%，cas號：137-26-8。
4.12福美雙標準儲備溶液：準確稱取12.5 mg標準品（4.11），用0.05%甲酸的甲醇溶液（4.7）溶解并定容至25 ml，得到濃度為500 mg/l標準儲備液，此溶液保存于棕色容量瓶中，可在-18℃條件下保存3個月。
4.13標準工作溶液：液相色譜法：根據(jù)需要取適量標準儲備液，以0.05%甲酸的甲醇溶液-水（50+50，體積比）（4.8）稀釋成適當?shù)臉藴使ぷ饕?；液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法：根據(jù)需要取適量標準儲備液，以空白基質(zhì)提取液，稀釋成適當?shù)臉藴使ぷ饕骸?br>4.14濾膜：0. 45μm，有機系。
5儀器和設(shè)備
5.1液相色譜儀，配紫外檢測器。
5.2液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜聯(lián)用儀，配電噴霧（esi）源。
5.3渦旋振蕩器。
5.4往復(fù)式振蕩器。
5.5旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。
5.6分析天平：感量0.1 mg和0.001 g。
5.7低溫離心機：可制冷至4℃，5 000 r/ min。
5.8塑料離心管：15 ml和50 ml。
6樣品制備與保存
樣品至少500g，取可食部分后將其切成小塊，用組織搗碎機將樣品勻漿，混合均勻后分成兩份，裝入潔凈的樣品袋內(nèi)，密閉并標識；在-18℃保存避光保存。在制樣的操作過程中，應(yīng)防止樣品受到污染或發(fā)生殘留物含量的變化。
7測定步驟
7.1提取
7.1.1稱取4g（精確到0. 01 g）均勻試樣于50 ml離心管中，加入30 ml乙腈（4.1），渦旋振蕩30s，往復(fù)振蕩提取10 min，在4℃下5 000 r/min冷凍離心5 min。上清液過無水硫酸鈉（4.10）至一干凈雞心瓶，再用30 ml乙腈重復(fù)以上步驟，合并提取液于同一雞心瓶。
7.1.2提取液于30℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至2 ml左右，將剩余溶液轉(zhuǎn)移至一干凈的15 ml離心管中，用1. 5ml甲醇-水（30+70，體積比）（4.3）洗滌雞心瓶，洗滌液合并至上述離心管中，用甲醇-水（30+70，體積比）（4.3）定容到4 ml，過濾膜，所得樣液直接供hplc測定。
7.1.3將7.1.2所得溶液用0.05%甲酸的甲醇溶液-水（50+50，體積比）（4.8）稀釋20倍，供hplc-ms/ms測定。
7.2測定
7.2.1液相色譜法測定方法
7.2.1.1液相色譜條件
液相色譜條件如下：
a）色譜柱：eclipse xdb-c18，250 mm×4.6 mm（內(nèi)徑），5μm，或相當者；
b）柱溫：25℃；
c）流動相：甲醇-水（50+ 50，體積比）；
d）分析時間：15 min；
e）流速：1.0 ml/min；
f）檢測波長：270nm；
g）進樣量：50μl。
7.2.1.2液相色譜測定
根據(jù)試樣中福美雙的含量情況，選定響應(yīng)值適宜的標準工作溶液進行色譜分析。標準工作溶液和待測樣液中福美雙的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器線性響應(yīng)范圍內(nèi)。對標準工作液和樣液等體積參插進樣測定。
在本方法條件下，福美雙的參考保留時間為9.0 min。福美雙的液相色譜圖參見附錄b中圖b. 1。
7.2.2液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法測定方法
7.2.2.1色譜條件
色譜條件如下；
a）色譜柱：eclipse xdb-c8，150 mm×2.1mm（內(nèi)徑），3.5μm，或相當者；
b）柱溫：25℃；
c）流動相：5 mmol/l醋酸銨溶液（0.05%甲酸）（4. 9）-甲醇（50+ 50，體積比）；
d）分析時間：8 min；
e）流速0.3ml/min；
f）進樣量：10μl。
7.2.2.2質(zhì)譜條件
質(zhì)譜條件如下：
a）離子化模式：電噴霧電離正離子模式（esi+）；
b）質(zhì)譜監(jiān)測方式：多反應(yīng)監(jiān)測（mrm）。
c）其他參考質(zhì)譜條件參見表a.1。
7.2.2.3液相色譜質(zhì)譜/質(zhì)譜測定
本方法采用外標法定量，定量離子為m/z=119.9。為減少基質(zhì)對定量的影響，需用空白樣液來配制所使用的基質(zhì)標準工作溶液。根據(jù)試樣中福美雙的含量情況，選定響應(yīng)值適宜的標準工作溶液進行色譜分析。標準工作溶液和待測樣液中福美雙的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器線性響應(yīng)范圍內(nèi)。對標準工作液和樣液等體積參插進樣測定。在上述色譜條件下，福美雙的保留時間約為5.1 min。福美雙的多反應(yīng)監(jiān)測（mrm）離子色譜圖參見圖c. 1。
7.3定性確證
按照上述條件測定樣品和標準品，樣品中待測物色譜峰保留時間與標準品對應(yīng)的保留時間偏差應(yīng)一致，允許偏差小于±2.5%；并且在扣除背景后的樣品譜圖中，各定性離子的相對豐度與濃度接近的同樣條件下得到的標準溶液譜圖相比，最大允許相對偏差不超過表1中規(guī)定的范圍，則可判斷樣品中存在對應(yīng)的被測物。
7.4空白實驗
除不加待測組分外，按上述測定步驟進行。液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜測定所用空白基質(zhì)溶液，是.上述空白溶液用0.05%甲酸的甲醇溶液-水（50+50，體積比）（4.8）稀釋所得。
7.5回收率試驗
陰性樣品中添加標準溶液，按步驟7.1~7.2操作，測定后計算樣品添加的回收率。
8結(jié)果計算
按式（1）計算試樣中福美雙的含量，計算結(jié)果需扣除空白值。
式中：
x——試樣中福美雙含量，單位為微克每千克（μg/kg）；
a——樣液中福美雙的峰面積；
c——標準工作溶液中福美雙的濃度，單位為納克每毫升（ng/ml）；
v——樣品溶液最終定容體積，單位為毫升（ml）；
a——標準工作溶液中福美雙的峰面積；
m——樣品溶液所代表最終試樣的質(zhì)量，單位為克（g）。
結(jié)果應(yīng)保留三位有效數(shù)字。
9測定低限與回收率
9.1測定低限
液相色譜和液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜的測定低限：梨、芹菜、香蕉為0.5 mg/kg，蘋果、白菜、西瓜、茄子為1. 0 mg/kg。
9.2回收率
9.2.1福美雙液相色譜回收率數(shù)據(jù)見表2。
9.2.2福美雙液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜回收率數(shù)據(jù)見表3。